[發明專利]一種蛋白核小球藻抗氧化肽及其制備方法

有效

• 申請號: 202110167140.8
• 申請日: 2021-02-05
• 公開（公告）號: CN112876548B
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發明（設計）人: 王際輝;肖珊;王璐;王波;蔡燕雪
• 申請（專利權）人: 東莞理工學院
• 主分類號: C07K14/405
• 分類號: C07K14/405;C07K1/34;C07K1/16;C07K1/14;C12P21/06
• 代理公司: 大連萬友專利代理有限公司 21219
• 代理人: 王麗新

本發明公開了一種蛋白核小球藻抗氧化肽及其制備方法，以蛋白核小球藻為原料，通過蛋白核小球藻粉破壁處理，提取小球藻蛋白，制備小球藻多肽，分離純化小球藻多肽，冷凍干燥，得到蛋白核小球藻抗氧化肽。所述抗氧化肽的氨基酸序列為∶VPADDL。本發明采用酶解法超聲輔助提取小球藻蛋白，含鹽量低，蛋白提取率高。使用多種酶制備小球藻抗氧化肽，以羥基自由基的清除率作為判別指標，能更精準的用于小球藻抗氧化肽的制備。采用截留分子量3000Da的超濾膜制備藻多肽，為下一步色譜分離獲得更純的藻抗氧化肽提供了方便條件。根據藻多肽分子量大小的不同采用凝膠層析分離方式，所得到的藻多肽純度更高。

技術領域

本發明涉及一種蛋白核小球藻抗氧化肽及其制備方法。

背景技術

傳統的合成抗氧化劑有可能引起一些不可預期的副作用，消費者對人工抗氧化劑在食品安全方面的顧慮很多，綠色健康食品日益受到消費者的關注，蛋白核小球藻(chlorella pyrenoidosa)是單細胞綠色微藻，廣泛分布于淡水和海水中。小球藻因富含蛋白質、膳食纖維、脂質、維生素、葉綠素和類胡蘿卜素以及活性代謝產物而備受關注。此外，小球藻還具有出色的免疫調節作用，抗氧化能力以及降血糖和降血脂作用，被聯合國糧食及農業組織(FAO)評為“綠色健康食品”。蛋白核小球藻抗氧化肽是一種天然抗氧化劑，目前，我國對澡蛋白利用率偏低，其制備方法復雜，提取的小球藻蛋白，含鹽量偏高，且蛋白提取率低，純度低等缺點。

發明內容

為解決上述現有技術的不足，本發明提供一種蛋白核小球藻抗氧化肽及其制備方法，該抗氧化肽具有良好的抗氧化能力。對科技、經濟和食品業的發展將具有重要意義。

本發明所采用的技術方案是一種蛋白核小球藻抗氧化肽，所述肽的氨基酸序列為∶VPADDL。

一種蛋白核小球藻抗氧化肽的制備方法，包括以下步驟∶(1)蛋白核小球藻粉破壁處理；(2)小球藻蛋白提取；(3)小球藻多肽制備；(4)小球藻多肽的分離純化。

進一步地，所述的步驟(1)中蛋白核小球藻粉的具體破壁方法為∶將小球藻粉過60目篩去除雜物，藻粉與純凈水的液料比為10：1；超聲30min，細胞破碎儀處理15min(3/2s)后，冷凍干燥為破壁小球藻粉，裝袋備用。

進一步地，所述的步驟(2)中小球藻蛋白提取的具體方法為∶稱取破壁小球藻粉，按照質量體積比1∶30的比例加入純水，并充分攪拌溶脹，調節pH至5.0，酶解溫度50℃，加入1％纖維素酶酶解3h,酶解結束后升溫至100℃滅酶10min,后于超聲功率480w超聲輔助提取40分鐘，再均質10分鐘，8000r/min離心10分鐘，取沉淀冷凍干燥，即得小球藻藻蛋白。

進一步地，所述的步驟(3)中小球藻藻多肽制備的具體方法為∶稱取小球藻藻蛋白，加20倍的純水溶解，加3％堿性蛋白酶，調pH至8.0、酶解溫度60℃，酶解時間6h，酶解結束后升溫至100℃滅酶10min，調節pH至2.0，酶解溫度37℃，加入2％胃蛋白酶酶解2h,調節pH至7.5，酶解溫度37℃，加入2％胰酶酶解2h,酶解結束后升溫至100℃滅酶10min,得到小球藻藻多肽酶解液，冷藏備用。

進一步地，所述的步驟(4)小球藻多肽的分離純化的具體方法為∶用截留分子量3000Da的超濾膜制備分子量小于3000Da的小球藻多肽溶液；將多肽溶液60℃真空濃縮后冷凍干燥，得到分子量小于3000Da的小球藻多肽；將分子量小于3000Da的小球藻多肽用SephadexG-15凝膠層析進行分離，即得到所述小球藻抗氧化肽。

本發明的有益效果是：本發明采用酶解法超聲輔助提取小球藻蛋白，含鹽量低，蛋白提取率高。使用多種酶制備小球藻抗氧化肽，以羥基自由基的清除率作為判別指標，能更精準的用于小球藻抗氧化肽的制備。采用截留分子量3000Da的超濾膜制備藻多肽，為下一步色譜分離獲得更純的藻抗氧化肽提供了方便條件。根據藻多肽分子量大小的不同采用凝膠層析分離方式，所得到的藻多肽純度更高。

附圖說明