[發(fā)明專利]一種他克莫司軟膏有關(guān)物質(zhì)測(cè)定的前處理方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110154476.0
• 申請(qǐng)日: 2021-02-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112730704B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-08-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏宗有;王娟;陳宇翔;江寧宇;陳韡彬;范建輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建省微生物研究所
• 主分類號(hào): G01N30/06
• 分類號(hào): G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 修斯文;蔡學(xué)俊

本發(fā)明公開(kāi)了一種他克莫司軟膏有關(guān)物質(zhì)測(cè)定的前處理方法，其是在以正己烷?丙酮混合溶液作為提取溶劑的基礎(chǔ)上，采用低溫凍融處理，以有效去除油性軟膏基質(zhì)對(duì)有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)的干擾，從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物質(zhì)的有效測(cè)定，其專屬性好，雜質(zhì)回收率符合要求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種他克莫司軟膏有關(guān)物質(zhì)測(cè)定的前處理方法。

背景技術(shù)

他克莫司（tacrolimus），也稱為FK-506或FR-900506，是1984年日本Fujisawa制藥公司從土壤放線菌中分離出來(lái)的一種具有大環(huán)內(nèi)酯結(jié)構(gòu)的新型強(qiáng)力免疫抑制劑。他克莫司的主要藥理作用在于能有效抑制T細(xì)胞激活，在肝移植抗排斥方面和治療特應(yīng)性皮炎方面具有其它藥物無(wú)可比擬的優(yōu)勢(shì)。近期研究發(fā)現(xiàn)他克莫司軟膏可以有效治療特應(yīng)性皮炎、銀屑病、脂溢性皮炎等，且其適應(yīng)癥仍在不斷擴(kuò)展。目前，他克莫司軟膏適于因潛在危險(xiǎn)而不宜使用傳統(tǒng)療法，或?qū)鹘y(tǒng)療法反應(yīng)不充分、或無(wú)法耐受傳統(tǒng)療法的中到重度特應(yīng)性皮炎患者，作為短期或間歇性長(zhǎng)期治療。

他克莫司軟膏的基質(zhì)組成中包含白凡士林、蜂蠟、石蠟、液體石蠟等成分，這些油脂性基質(zhì)輔料均為多組份混合物，由于國(guó)內(nèi)各廠家制備工藝和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)不同，其所含組分情況也各不相同，即使同一廠家生產(chǎn)的不同批次的輔料其性質(zhì)也存在較大差異，這往往會(huì)使其有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果存在巨大偏差。對(duì)雜質(zhì)的控制是藥品研發(fā)領(lǐng)域一個(gè)非常重要的環(huán)節(jié)，直接關(guān)系到藥品的穩(wěn)定性、有效性及安全性，采用常規(guī)的溶劑提取或固相萃取柱提取等方法無(wú)法保證將不同批次油脂性基質(zhì)與他克莫司及其相關(guān)物質(zhì)有效分離出來(lái)。發(fā)明專利CN 109828038A中提出采用正己烷-乙酸乙酯混合溶液進(jìn)行提取，并采用固相萃取柱進(jìn)行分離。但有文獻(xiàn)報(bào)道部分品牌的乙酸乙酯會(huì)產(chǎn)生不明雜質(zhì)，從而影響分析結(jié)果。因此，開(kāi)發(fā)一種有效的他克莫司軟膏樣品的前處理方法，以去除油脂性基質(zhì)中輔料的干擾，保證他克莫司及其相關(guān)物質(zhì)的有效提取，有助于提高分析方法的重復(fù)性、準(zhǔn)確性及適用性，并可為制劑的質(zhì)量控制提供良好保證。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種他克莫司軟膏有關(guān)物質(zhì)測(cè)定的前處理方法，其可有效去除油性軟膏基質(zhì)對(duì)有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)的干擾，保證他克莫司及其相關(guān)物質(zhì)的有效提取，提高分析方法的重復(fù)性、準(zhǔn)確性及適用性。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種他克莫司軟膏有關(guān)物質(zhì)測(cè)定的前處理方法，其包括如下步驟：

（1）樣品提取：稱取適量他克莫司軟膏于玻璃離心管中，加入正己烷-丙酮混合溶液，劇烈振蕩至混懸完全后低溫靜置，再以4000r/min離心5min，取上清液，重復(fù)提取1次后，合并上清液；

（2）固相萃取柱分離：將步驟（1）所得上清液全部轉(zhuǎn)移入固相萃取柱，使他克莫司及其相關(guān)物質(zhì)完全吸附于固相萃取柱后，再用正己烷-乙酸乙酯混合溶液進(jìn)行淋洗，之后先用乙酸乙酯洗脫，待乙酸乙酯洗脫完成后再加入乙腈進(jìn)行洗脫，用梨形瓶分別收集乙酸乙酯和乙腈的洗脫液，并將所有洗脫液合并，旋轉(zhuǎn)蒸干，再在所得殘留物中加入少量正己烷-正丁基氯-乙腈混合溶液，渦旋使殘留物溶解后，所得溶液經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾后用于HPLC定性測(cè)定。

步驟（1）中所用他克莫司軟膏與正己烷-丙酮混合溶液的質(zhì)量體積比為1g:5mL；所述正己烷-丙酮混合溶液中正己烷與丙酮的體積比為5:1-15:1，優(yōu)選為10:1。

步驟（1）中所述低溫靜置的溫度為-50~-5℃，優(yōu)選為-20℃，時(shí)間為20-40min，優(yōu)選為30min。

步驟（2）所用正己烷-乙酸乙酯混合溶液與上清液的體積比為3:1；所述正己烷-乙酸乙酯混合溶液中正己烷與乙酸乙酯的體積比為1:1-10:1，優(yōu)選為2:1。

步驟（2）中用于洗脫的乙酸乙酯及乙腈與上清液的體積比均為1:2。。

步驟（2）所述正己烷-正丁基氯-乙腈混合溶液中正己烷、正丁基氯與乙腈的體積比為1:1:1。

本發(fā)明的顯著優(yōu)勢(shì)在于：