[發明專利]一種羊毛硫肽LichencinA3及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110147380.1
• 申請日: 2021-02-03
• 公開（公告）號: CN112851788B
• 公開（公告）日: 2022-11-01
• 發明（設計）人: 劉洪偉;姚彩苗;汪步青;張麗萍;王雅娜
• 申請（專利權）人: 河北省科學院生物研究所
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/70;C12N15/12;A61K38/17;A61P31/04
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理有限公司 11562
• 代理人: 王穎

本發明公開了一種羊毛硫肽LichencinA3及其制備方法和應用，屬于肽類抗生素的應用領域；該羊毛硫肽LichencinA3的生物合成基因簇來源于地衣芽胞桿菌公開數據庫的挖掘，即將挖掘所得羊毛硫肽前體肽LicA3、合成酶LicMB和肽酶結構域LicT150基因共轉化至感受態細胞E.coli BL21(DE3)，構建共表達菌株，通過異源表達共表達菌株獲得羊毛硫肽LichencinA3；本發明所述羊毛硫肽LichencinA3具有廣譜殺菌作用，不僅對金黃色葡萄球菌等革蘭氏陽性菌有較強的抑制效果，還能抑制革蘭氏陰性致病菌，如鞘氨醇單胞菌和肺炎克雷伯氏菌。

技術領域

本發明涉及肽類抗生素的應用領域，特別是涉及一種羊毛硫肽LichencinA3及其制備方法和應用。

背景技術

抗生素是全球最常見的處方藥物，但在臨床使用中由于耐受藥性細菌的出現，使抗生素的使用面對越來越嚴重的挑戰。目前全球為抵御致病菌而導致的抗生素亂用問題日益嚴重，為此尋找一些新型和環境友好型兼備的抗菌物質代替抗生素已成為研究熱點。抗菌肽可以快速有效地殺死具有抗生素抗性的細菌，被認為是傳統抗生素的最佳替代物。

羊毛硫肽是革蘭氏陽性菌產生的一種環狀小分子多肽，對多種食源性致病菌及多藥物抗性細菌都有一定的抑制作用。羊毛硫肽類抗菌肽作用靶點通常位于細胞壁或細胞膜上，造成細胞壁或膜的結構不完整，形成孔洞從而殺死細菌，這一殺菌機制也導致羊毛硫肽類抗菌肽的耐藥性極少出現。因其特殊的靶標識別作用，羊毛硫肽類抗菌肽幾乎不會產生抗性，可作為傳統抗生素代替藥物。目前已經發現及報道的羊毛硫肽類抗菌肽在50種左右，其中NVB302、Mutacin1140、Duramycin、Gallidermin、Nisin及 Microbisporicin已經進入臨床研究。這樣高的臨床研究轉化率使得羊毛硫肽類抗菌肽在藥物研發中極具前景。

但是羊毛硫肽類抗菌肽通常存在抗菌譜較窄和抗逆性不足的缺點，因此開發研究新型高效的抗逆性較強的羊毛硫肽類抗菌肽具有重要的價值。隨著高通量測序技術的快速發展，基于大量的微生物基因組數據顯示，地衣芽孢桿菌在合成多種新穎的羊毛硫肽類抗菌肽方面，其潛力遠超以往的認知。地衣芽孢桿菌中存在很多編碼羊毛硫肽類抗菌肽的生物合成基因簇，這些基因簇在野生型菌株通常是沉默的，通過異源表達的方法實現這些羊毛硫肽類抗菌肽的生產對于研發新型高效的羊毛硫肽類抗菌肽具有重要意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種羊毛硫肽LichencinA3及其制備方法和應用，以解決上述現有技術存在的問題。

為實現上述目的，本發明提供了如下方案：

本發明提供一種羊毛硫肽LichencinA3，其分子結構式如下：

本發明提供一種所述羊毛硫肽LichencinA3的制備方法，具體包括如下步驟：

將羊毛硫肽前體肽LicA3、合成酶LicMB和肽酶結構域LicT150基因共轉化至感受態細胞，構建共表達菌株，共表達菌株異源表達后經純化即得羊毛硫肽LichencinA3。

進一步地，步驟（1）所述羊毛硫肽前體肽LicA3基因片段的核苷酸序列如SEQ IDNO:2 所示。

進一步地，步驟（1）所述羊毛硫肽前體肽LicA3的氨基酸序列如SEQ ID NO:1 所示。

進一步地，步驟（1）所述合成酶LicMB基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:3 所示。

進一步地，步驟（1）所述肽酶結構域LicT150基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:4 所示。

進一步地，所述純化的具體方法為半制備高效液相色譜法，羊毛硫肽LichencinA3在44 min洗脫出峰。