[發明專利]一種莫干山野生紅托竹蓀菌種的分離和純化方法

有效

• 申請號: 202110123216.7
• 申請日: 2021-01-29
• 公開（公告）號: CN112931058B
• 公開（公告）日: 2022-10-11
• 發明（設計）人: 閆靜;王偉科;周祖法;陸娜
• 申請（專利權）人: 杭州市農業科學研究院
• 主分類號: A01G18/40
• 分類號: A01G18/40;A01G18/20
• 代理公司: 杭州知閑專利代理事務所(特殊普通合伙) 33315
• 代理人: 萬靜

本發明公開了一種莫干山野生紅托竹蓀菌種的分離和純化方法，該方法包括：采集莫干山竹林中的野生紅托竹蓀蛋進行清洗和消毒；將紅托竹蓀蛋縱向剖開，取出中間第二層的菌裙組織，接種至分離培養基上，進行分離培養；挑取菌落尖端菌絲接種到新的分離培養基上，繼續培養，獲得莫干山野生紅托竹蓀純菌種。本發明方法通過分離野生紅托竹蓀的白色菌群，并采用竹林土、檸檬酸銨和馬鈴薯用量減半的PDA綜合培養基作為分離培養基組分進行配合使用，不僅能夠分離純化獲得到莫干山野生紅托竹蓀菌種，而且能夠有效縮短菌種的萌發時間，提高萌發率，促進菌種菌絲的生長，以及抑制菌絲的老化。

技術領域

本發明涉及食用菌育種和生產技術領域，尤其涉及一種莫干山野生紅托竹蓀菌種的分離和純化方法。

背景技術

紅托竹蓀是常見并可供食用的四種竹蓀中最名貴的一種。野生紅托竹蓀主要生長于貴州、云南、四川I和浙江等竹林的腐殖土。自從人工分離馴化以來，紅托竹蓀經過四五十年的摸索，目前已經可以大規模人工栽培。紅托竹蓀最早是在貴州省織金縣野生馴化開始人工栽培的，因此目前紅托竹蓀的種植主要集中在貴州省內，是貴州省的名優特產。紅托竹蓀在貴州漫長的栽培過程中，目前已出現了嚴重的菌種退化，存在品種單一，優良品種緊缺的問題。

莫干山風景名勝區位于浙江省湖州市德清縣，屬天目山余脈，主峰塔山海拔758米。以竹、泉、云和清、綠、涼、靜的環境著稱，素有“清涼世界”之美譽。莫干山獨特的自然條件孕育了豐富的野生菌，在該處的竹林經常能找到野生紅托竹蓀。由于紅托竹蓀，野生種分離不易萌發，菌絲萌發后在培養基中隨著培養時間的延長，容易發生色變，主要由白色變為淡紅色，菌絲易失水等獨特的生物學特性，從而很難獲得莫干山野生紅托竹蓀純菌種。同時由于紅托竹蓀特殊的生物學特性，常規的瓊脂培養基配方都不適紅托竹蓀菌種分離、純化和擴繁，給紅托竹蓀野生資源收集、純化造成困難，特別是莫干山野生紅托竹蓀種質資源難以利用。

公布號為CN110637681A的名稱為“一種紅托竹蓀母種的培養方法”的發明專利申請提到利用竹素土、馬尾松針、雜木屑等物質煮汁配制瓊脂培養基，一方面竹素土配制程序復雜，需將竹枝、竹根、竹屑、竹葉以及廢舊竹片、斷竹材料等進行粉碎，按照竹元素粉碎物、牛(羊)糞粉、沼渣、復合肥為100:15:10:1的比例混勻并發酵腐熟，所需物質種類多，配制時間長，另一方面，這一瓊脂培養基用于紅托竹蓀菌種擴繁可以，用于分離野生紅托竹蓀萌發困難，尤其是莫干山野生紅托竹蓀菌種萌發困難，接種塊易褐化。

公告號為CN104920065B的名稱為“一種梵凈山野生紅托竹蓀母種制作方法”的發明專利申請提到一種野生紅托竹蓀菌種分離方法，但莫干山野生紅托竹蓀利用該方法分離萌發速度和菌絲生長速度都很慢，容易變紅老化，難以獲得高利用價值的純菌種。文獻“紅托竹蓀母種分離培養初探”提到的方法中用于分離的紅托竹蓀為人工栽培所得，用該方法分離莫干山野生紅托竹蓀也不能獲得成功。同時利用木屑等固體菌種進行紅托竹蓀菌種保藏、擴繁，污染不易發現，造成菌種純化困難，容易退化。例如公布號為CN110100657A的名稱為“一種紅托竹蓀試管母種的生產方法”的專利申請采用的即是木屑培養基。

因此，有必要提供一種適合莫干山野生紅托竹蓀的分離和純化方法。

發明內容

本發明提供了一種莫干山野生紅托竹蓀菌種的分離和純化方法，該方法適用于莫干山野生紅托竹蓀的分離和純化，不僅能夠分離純化獲得到莫干山野生紅托竹蓀菌種，而且能夠有效縮短菌種的萌發時間，提高萌發率，促進菌種菌絲的生長，以及抑制菌絲的老化。

具體技術方案如下：

本發明提供了一種莫干山野生紅托竹蓀菌種的分離和純化方法，包括以下步驟：

(1)采集莫干山竹林中未開出的完好、硬實野生紅托竹蓀蛋，清除野生紅托竹蓀蛋表面的雜塵，對野生紅托竹蓀蛋進行清洗和消毒；

(2)將野生莫干山野生紅托竹蓀蛋縱向剖開，取出中間第二層的菌裙組織，接種至分離培養基上，將培養基封口后置于黑暗條件下進行分離培養；