[發(fā)明專利]一種蘆丁對呲柔比星誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110104345.1
• 申請日: 2021-01-26
• 公開（公告）號: CN113151392A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 任立群;李琪;李相軍;王亞帝;張袆冰
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12Q1/66;C12Q1/6851;G01N21/64
• 代理公司: 合肥順超知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 34120
• 代理人: 徐文恭;張芳

本發(fā)明公開了一種蘆丁(Rutin,RUT)對吡柔比星(THP)誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究方法，體分為以下步驟：S1、將小鼠HL?1心肌細(xì)胞系、人乳腺上皮細(xì)胞MCF 10A和人乳腺癌細(xì)胞系MDA?MB?231在高糖培養(yǎng)基(DMEM；10％胎牛血清(FBS；Hyclone)中培養(yǎng)；S2、在DMSO中制備1mol/L的RUT儲備溶液，并在?20℃下保存，用無血清培養(yǎng)基稀釋溶液，并將DMSO的濃度控制在0.1％以下，將細(xì)胞以5×10⁴細(xì)胞/mL的密度接種在96孔板中24小時(shí)，然后用不同濃度的RUT(0–800μM)處理。確定miR?129?1?3p是通過下調(diào)GRIN2D介導(dǎo)的Ca²⁺通路來保護(hù)THP誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡和促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞凋亡，揭示了蘆丁保護(hù)心肌并增敏吡柔比星抗乳腺癌的作用及機(jī)制，miR?129?1?3p/Ca²⁺信號通路可作為開發(fā)新的心臟保護(hù)藥物以控制THP誘導(dǎo)的心臟毒性及增強(qiáng)抗癌效果的靶點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及抗癌技術(shù)領(lǐng)域,具體是一種蘆丁對呲柔比星誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究方法。

背景技術(shù)

蒽環(huán)類藥物是多種實(shí)體腫瘤和血液淋巴系統(tǒng)惡性腫瘤的基礎(chǔ)性治療藥物,然而,臨床觀察和研究顯示蒽環(huán)類藥物可誘導(dǎo)心臟毒性發(fā)生,且往往呈進(jìn)展性和不可逆性。2011版中國臨床腫瘤學(xué)會(CSCO)專家共識指出,給予蒽環(huán)類藥物后6年超過50％的患者可發(fā)生左心室組織和功能亞臨床心臟超聲變化。呲柔比星(Pirarubicin, THP)是蒽環(huán)類藥物的一種,其所致心臟毒性等不良反應(yīng)低于其他蒽環(huán)類藥物,因此臨床中廣為應(yīng)用。但在接受THP化療的患者依然會出現(xiàn)不同程度的心臟毒性反應(yīng)。右雷佐生(右丙亞胺；DZR) 是美國食品藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)的唯一蒽環(huán)類藥物心臟保護(hù)劑,被美國腫瘤臨床實(shí)踐及國內(nèi)外其他多種指南推薦,廣泛應(yīng)用于蒽環(huán)類藥物心臟毒性的預(yù)防和治療。但有學(xué)者提出該藥可能會降低蒽環(huán)類藥抗癌藥效, 并且骨髓抑制患者應(yīng)用DZR 會更多引起嚴(yán)重粒細(xì)胞減少、血小板減少等不良反應(yīng)^[1]。因此,尋找對心臟毒性具有良好防治效果的藥物顯得尤為重要。

通過近年一直對RUT 的心血管系統(tǒng)的保護(hù)及抗腫瘤的作用進(jìn)行研究,證實(shí)其能夠抑制異丙腎上腺素誘導(dǎo)的心肌纖維化；進(jìn)而對RUT 保護(hù)THP誘導(dǎo)的心臟毒性進(jìn)行了研究,并預(yù)測可能與微小RNA(microRNA,miRNA)調(diào)節(jié)有關(guān)。miRNA 通過調(diào)控下游靶基因,從而發(fā)揮生物學(xué)功能,為深入了解RUT對THP 誘導(dǎo)心臟毒性的保護(hù)作用提供了新思路。通過分析miRNA-靶基因的表達(dá)相關(guān)性及其互作關(guān)系,揭示RUT在改善 THP所致心臟毒性中發(fā)揮作用的機(jī)制,對腫瘤化療患者在使用蒽環(huán)類藥物過程中減輕心臟毒性并增強(qiáng)抗癌療效具有極其重要的臨床現(xiàn)實(shí)意義,因此提出了一種RUT對THP 誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究方法。發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種蘆丁對呲柔比星誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究方法,以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種蘆丁對呲柔比星誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究方法,具體分為以下步驟：

S1、將小鼠HL-1心肌細(xì)胞系、人乳腺上皮細(xì)胞MCF 10A和人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231 在高糖培養(yǎng)基(DMEM；10％胎牛血清(FBS；Hyclone)中培養(yǎng)；

S2、在DMSO中制備1mol/L的RUT儲備溶液,并在-20℃下保存,用無血清培養(yǎng)基稀釋溶液,并將DMSO的濃度控制在0.1％以下,將細(xì)胞以5×10⁴細(xì)胞/mL 的密度接種在96孔板中24小時(shí),然后用不同濃度的RUT(0–800μM)處理,與RUT孵育6小時(shí),12小時(shí)和24 小時(shí)后,向每個(gè)孔中添加10μL細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8,在37℃下溫育2小時(shí)后,使用BioRad POLARstar 酶標(biāo)儀測量450nm處的吸光度；

S3、用無血清DMEM稀釋THP溶液；