[發(fā)明專利]一種利用酶催化誘導(dǎo)適配體釋放篩選酶抑制劑的高通量液晶檢測(cè)平臺(tái)制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110103824.1
• 申請(qǐng)日: 2021-01-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112945954B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-08-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡瓊政;武文麗;夏爽
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省分析測(cè)試中心
• 主分類號(hào): G01N21/84
• 分類號(hào): G01N21/84
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 鄭平

本發(fā)明屬于分析檢測(cè)領(lǐng)域，涉及一種利用酶催化誘導(dǎo)適配體釋放篩選酶抑制劑的高通量液晶檢測(cè)平臺(tái)制備方法，包含以下的組分：載玻片、銅網(wǎng)、液晶分子、表面活性劑、適配體編碼DNA、底物、底物特異性轉(zhuǎn)化酶。本發(fā)明利用上述成分修飾液晶生物傳感器，實(shí)現(xiàn)了對(duì)酶抑制劑的高效篩選，其效果優(yōu)于目前現(xiàn)存篩選方法。本發(fā)明的檢測(cè)方法靈敏度高，耗時(shí)短、制備方法簡(jiǎn)單、選擇性良好、快速簡(jiǎn)易、成本低、無(wú)需使用大型儀器，對(duì)于高通量篩選酶抑制劑有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種篩選酶抑制劑的液晶生物傳感器及對(duì)酶抑制劑的高通量篩選。

背景技術(shù)

公開(kāi)該背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對(duì)本發(fā)明的總體背景的理解，而不必然被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已經(jīng)成為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

酶抑制劑是一種可以抑制生物體內(nèi)與某種疾病有關(guān)的專一酶活性，從而獲得療效的物質(zhì)。酶抑制劑特異性作用于酶的某些基團(tuán)，降低酶的活性甚至使酶完全喪失活性而降低酶促反應(yīng)速率的物質(zhì)。目前，合成藥是酶抑制劑的主要來(lái)源，將高通量篩選技術(shù)與組合化學(xué)和組合生物合成技術(shù)的結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了酶抑制劑的大量篩選，是世界許多大制藥公司篩選酶抑制劑新藥的主要渠道。

紫外可見(jiàn)光譜法是目前應(yīng)用最廣泛的酶抑制活性的評(píng)價(jià)方法。通過(guò)特定的吸光度可以測(cè)定抑制水平。然而，許多潛在抑制劑的吸收光譜會(huì)干擾讀出信號(hào)，導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。高效液相色譜法也可以用于篩選酶抑制劑，但耗時(shí)長(zhǎng)且成本高。因此，開(kāi)發(fā)一種簡(jiǎn)單、高效、低成本、靈敏度高、準(zhǔn)確度高的潛在酶抑制劑篩選平臺(tái)是非常必要的。

液晶生物傳感器是一種前沿的生物傳感技術(shù)，其具有構(gòu)造簡(jiǎn)單、成本低、能耗低、無(wú)需標(biāo)記、樣品用量少、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，在生命科學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)和食品安全領(lǐng)域展現(xiàn)了廣闊的應(yīng)用前景，逐漸引起國(guó)內(nèi)外研究者的廣泛關(guān)注。液晶生物傳感器在小分子物質(zhì)如葡萄糖、蛋白質(zhì)、核酸等生物分子檢測(cè)中的應(yīng)用愈加廣泛，具有廣闊的市場(chǎng)化前景。液晶界面的外部刺激會(huì)引起液晶取向的變化，這些變化可以被放大并轉(zhuǎn)換成特定的光學(xué)信號(hào)輸出，利用這種變化可以傳導(dǎo)信息，從而構(gòu)建液晶生物傳感器。適配體是一種寡核苷酸，在被其靶標(biāo)識(shí)別后可以折疊成特定的構(gòu)象結(jié)構(gòu)。適配體因其成本低、生產(chǎn)方便、與靶標(biāo)結(jié)合特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，在各領(lǐng)域檢測(cè)技術(shù)中得到了廣泛的應(yīng)用。

發(fā)明人發(fā)現(xiàn)：目前尚無(wú)一種簡(jiǎn)易平臺(tái)能夠?qū)γ敢种苿┻M(jìn)行快速、有效篩選，限制了該方向研究的發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種利用酶催化誘導(dǎo)適配體釋放篩選酶抑制劑的高通量液晶檢測(cè)平臺(tái)的制備方法，通過(guò)分析帶有液晶分子的銅網(wǎng)的光學(xué)信號(hào)對(duì)酶抑制劑進(jìn)行高效篩選。

為實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供了一種利用酶催化誘導(dǎo)適配體釋放篩選酶抑制劑的高通量液晶檢測(cè)平臺(tái)，包括：液晶分子、銅網(wǎng)、表面活性劑、小分子底物、底物適配體、底物轉(zhuǎn)化特異性酶、載體；

所述載體負(fù)載有銅網(wǎng)；

所述銅網(wǎng)上依次附著有液晶分子和表面活性劑的混合物、待測(cè)制藥物與底物轉(zhuǎn)化特異性酶、小分子底物、適配體DNA的混合物；

其中，所述小分子底物與適配體DNA特異性結(jié)合；

底物轉(zhuǎn)化特異性酶誘導(dǎo)適配體-特異性底物復(fù)合物的斷裂。

本發(fā)明通過(guò)酶催化誘導(dǎo)適配體釋放策略，即酶誘導(dǎo)適配體-特異性底物復(fù)合物的斷裂來(lái)傳導(dǎo)酶抑制劑是否有效這一信息；并結(jié)合帶有液晶分子的銅網(wǎng)的光學(xué)信號(hào)對(duì)酶抑制劑進(jìn)行高效篩選，可以對(duì)酶抑制劑進(jìn)行快速、有效篩選。

本發(fā)明的第二個(gè)方面，提供了一種利用酶催化誘導(dǎo)適配體釋放篩選酶抑制劑的高通量液晶檢測(cè)平臺(tái)的制備方法，包括：

將載體進(jìn)行預(yù)處理；

在預(yù)處理的載體上負(fù)載銅網(wǎng)；