[發明專利]柔紅霉素的進罐種子的培養方法

在審

• 申請號: 202110097848.0
• 申請日: 2021-01-25
• 公開（公告）號: CN113151379A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 袁異;張幀;吳相偉;張春蘭;朱文杰
• 申請（專利權）人: 道中道（菏澤）制藥有限公司
• 主分類號: C12P19/56
• 分類號: C12P19/56
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種柔紅霉素的進罐種子的培養方法，其中，其步驟如下：S1：菌種活化：將菌種在培養基中于25?29℃下活化培養10?14天，待長出單菌落后，轉接至固體斜面培養基上，培養得到菌體，待用；S2：搖瓶發酵培養：將活化后的菌株制成菌懸液，而后按1?5％體積的接種量將柔紅霉素菌懸液接種到搖瓶發酵培養基中，以170?190轉/分鐘的轉速，25?30℃振蕩培養40?52小時，即得搖瓶發酵培養液；S3：種子罐培養：S4：發酵罐培養；本發明采用該培養基及其發酵方法，能夠降低能耗和發酵成本，為提高產品的市場競爭力，提高有效保障；通過調整不同的發酵環境，保證其供應充足，從而實現柔紅霉素穩定、高效地生產。

技術領域

本發明屬于發酵工程領域，特別是柔紅霉素的進罐種子的培養方法。

背景技術

柔紅霉素是一種強效蒽環類抗腫瘤抗生素，主要用于治療對常用抗腫瘤 藥物產生耐藥性的急性粒細胞白血病或急性淋巴細胞白血病，對淋巴肉瘤、 神經母細胞瘤、骨骼肌瘤、絨癌也有一定療效。柔紅霉素的作用機理與阿霉 素類似，能直接與DNA結合，抑制DNA復制與RNA合成，對RNA的影響尤為 顯著，能選擇性地作用于嘌呤核苷。

在生產柔紅霉素發酵的過程中，因發酵周期較長，導致能耗較高，柔紅 霉素的發酵成本高，缺乏市場競爭力。現有需要調整周期長，在短時間內以 達到很好的想效果，縮小生產成本。

發明內容

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種柔紅霉素的進罐種子 的培養方法，其中，其步驟如下：

S1：菌種活化：將菌種在培養基中于25-29℃下活化培養10-14天，待長 出單菌落后，轉接至固體斜面培養基上，培養得到菌體，待用；

S2：搖瓶發酵培養：將活化后的菌株制成菌懸液，而后按1-5％體積的接 種量將柔紅霉素菌懸液接種到搖瓶發酵培養基中，以170-190轉/分鐘的轉速， 25-30℃振蕩培養40-52小時，即得搖瓶發酵培養液；

S3：種子罐培養：將搖瓶發酵培養液按1％-10％體積接種量接入種子罐中， 溫度：27-29℃、通風比為：0.05-0.22V/V·m、攪拌速率：160-200rpm、罐 壓：0.05-0.12Mpa、發酵培養24小時，得種子培養液；柔紅霉素發酵種子罐 培養過程按照培養時間分為3個階段：培養0-12h階段；培養12-16h階段； 培養16-24h階段；

其中培養0-12h階段，控制培養溫度：27℃；罐壓：0.05-0.10MPa；通 風比V/V·min：0.05-0.08；攪拌速率：160-180rpm；

培養12-16h階段，控制培養溫度：調節降溫系統，通過菌種生長產生的 熱量將罐溫升溫至28℃；罐壓：0.08-0.10MPa；通風比V/V·min：0.12-0.14， 攪拌速率：180-200rpm；

培養16-24h階段，控制培養溫度：29℃；罐壓：0.10-0.12MPa；通風比 V/V·min：0.20-0.22；攪拌速率：180-200rpm；

S4：發酵罐培養：按3-3.5％體積的接種量將種子培養液接入發酵罐中， 通入無菌空氣在26-29℃、攪拌速率180-200rpm、罐壓0.05-0.12Mpa、發酵 培養120-180小時，得到柔紅霉素發酵液。

優選的，在步驟S3中12-16h階段流加葡萄糖，控制葡萄糖濃度大于 0.3％。

優選的，所述步驟S1中的培養基中含有馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂。

優選的，所述步驟S3中種子罐在128℃下蒸汽空消滅菌30分鐘，裝入種 子培養基后再120℃蒸汽滅菌30分鐘，保壓降溫25-30℃，而后接種搖瓶發 酵培養液，種子培養基裝量為罐體積的60-70％。

有益效果：