[發明專利]用于檢測拉蒂諾病毒、莫巴拉病毒和莫佩亞病毒的引物探針、靶標組合、試劑盒和方法

有效

• 申請號: 202110096385.6
• 申請日: 2021-01-25
• 公開（公告）號: CN112662817B
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發明（設計）人: 李建東;杜珊珊;李阿茜;梁米芳;李德新;王世文;黃曉霞;李川;王芹;孫麗娜;蕪為
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 孫怡

1.用于檢測拉蒂諾病毒、莫巴拉病毒和莫佩亞病毒的引物探針組合，其特征在于，含有三對特異性引物和三條特異性探針，其中，所述特異性引物的序列如SEQ ID NO.1-6所示，所述特異性探針的序列如SEQ ID NO.7-9所示。

2.根據權利要求1所述的引物探針組合，其特征在于，所述特異性探針分別標記產生不同熒光色的熒光基團，所述熒光基團包括熒光報告基團和熒光猝滅基團；

所述熒光報告基團為選自FAM、HEX、Texas Red、CY5、TET、JOE、CY3、TAMRA、ROX、LCRED640、LC RED705中的任一種；所述熒光猝滅基團為選自BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcyl中的任一種。

3.根據權利要求1或2所述的引物探針組合，其特征在于，序列如SEQ ID NO.7所示的特異性探針的5’端標記FAM熒光報告基團，3’端標記BHQ1熒光淬滅基團；序列如SEQ ID NO.8所示的特異性探針的5’端標記HEX熒光報告基團，3’端標記BHQ1熒光淬滅基團；序列如SEQID NO.9所示的特異性探針的5’端標記Texas Red熒光報告基團，3’端標記BHQ2熒光淬滅基團。

4.用于檢測拉蒂諾病毒、莫巴拉病毒和莫佩亞病毒的病毒基因組保守區靶標組合，其特征在于，含有三條靶標，其中，靶標的序列如SEQ ID NO.10-12所示。

5.權利要求1～3任一項所述的引物探針組合或權利要求4所述的病毒基因組保守區靶標組合在制備用于檢測拉蒂諾病毒、莫巴拉病毒和莫佩亞病毒的試劑盒中的應用。

6.用于拉蒂諾病毒、莫巴拉病毒和莫佩亞病毒單獨或同時檢測的試劑盒，其特征在于，包含權利要求1～3任一項所述的引物探針組合，和/或，權利要求4所述的病毒基因組保守區靶標組合。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒進行實時熒光定量RT-PCR檢測時的反應程序為：50℃逆轉錄30min；95℃預變性10min，95℃變性15s、60℃退火60s，運行40個循環。

8.根據權利要求6或7所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒在進行實時熒光定量RT-PCR檢測時，每25μL反應體系為：2×緩沖液12.5μL，10μM上游引物0.5μL,10μM下游引物0.5μL，10μM探針0.25μL，酶1μL，模板5μL，用無RNA水解酶的純凈水補足至25μL。

9.一種非疾病診斷目的利用實時熒光定量RT-PCR分別檢測拉蒂諾病毒、莫巴拉病毒和莫佩亞病毒的方法，其特征在于，以待測樣品的RNA為檢測模板，利用如SEQ ID NO.1-6所示的特異性引物和如SEQ ID NO.7-9所示的特異性探針進行實時熒光定量RT-PCR檢測，根據擴增曲線判斷待測樣品中是否含有相應病毒。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，所述實時熒光定量RT-PCR的反應程序為：50℃逆轉錄30min；95℃預變性10min，95℃變性15s、60℃退火60s，運行40個循環；

所述實時熒光定量RT-PCR的每25μL反應體系為：2×緩沖液12.5μL，10μM上游引物0.5μL,10μM下游引物0.5μL，10μM探針0.25μL，酶1μL，模板5μL，RNase Free Water補足至25μL。