[發(fā)明專利]一種有機磷類三唑磷農(nóng)藥的半抗原及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110095331.8
• 申請日: 2021-01-25
• 公開（公告）號: CN112898343A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐東輝;劉廣洋;陳鴿;林桓;高宇航;高明坤;田明碩;張延國
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: C07F9/6518
• 分類號: C07F9/6518
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 王煥

本發(fā)明涉及免疫化學(xué)分析及農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種有機磷類三唑磷農(nóng)藥的半抗原及其制備方法。本發(fā)明的有機磷類三唑磷農(nóng)藥半抗原的制備方法，以1?苯基?3?羥基?1,2,4?三唑為原料，通過硝化反應(yīng)、取代反應(yīng)、還原反應(yīng)和引入羧基活性基團反應(yīng)合成有機磷類三唑磷農(nóng)藥的半抗原，以利于制備出對有機磷類農(nóng)藥特異性強親和力高的抗體。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫化學(xué)分析及農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種有機磷類三唑磷農(nóng)藥的半抗原及其制備方法。

背景技術(shù)

農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全影響著人們的身體健康，越來越受到大家的關(guān)注。其中農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留不僅會造成環(huán)境污染，還對人體的健康造成損害。尤其是隨著有機磷類農(nóng)藥的不規(guī)范使用以及濫用情況時有發(fā)生，導(dǎo)致了有機磷農(nóng)藥在農(nóng)作物上大量殘留，嚴(yán)重威脅著人類健康和生態(tài)環(huán)境。因此，開發(fā)高靈敏、低檢測限的農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留快速的免疫檢測分析方法，是一個亟待解決的科研問題，加強三唑磷檢測方法學(xué)研究對于保障我國食品安全和農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易具有重要意義。

建立免疫分析方法，首先必須制備出對農(nóng)藥特異性強親和力高的抗體。一般農(nóng)藥小分子化合物分子量小于1000道爾頓，為小分子半抗原。對于農(nóng)藥小分子化合物一般不具備免疫原性，不能刺激動物的免疫應(yīng)答反應(yīng)而產(chǎn)生抗體。因此必須與大分子載體偶聯(lián)后才具有免疫原性，即能與相應(yīng)的抗體發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)。農(nóng)藥半抗原分子上必須具備能共價結(jié)合到載體上的一些活性基團(-NH2、-COOH、-OH、-SH等)。半抗原應(yīng)具備與待測物類似的化學(xué)特征，以減少交叉污染，保證農(nóng)藥半抗原與載體的大分子復(fù)合物的特征結(jié)構(gòu)能夠易于被免疫活性細(xì)胞識別。根據(jù)有機合成，生物化學(xué)和免疫學(xué)等生物技術(shù)手段，設(shè)計合成具備活性基團的理想半抗原。

若獲得在免疫反應(yīng)中具有高特異性和親和力的抗體，首先具備具有高免疫原性和特異性的人工抗原。首先合成保留農(nóng)藥分子結(jié)構(gòu)且?guī)Щ钚曰鶊F的半抗原，其次使得半抗原通過活性基團(-NH2、-COOH、-OH、-SH等)與載體蛋白(比如白蛋白、卵蛋白)等反應(yīng)，制備出抗原。農(nóng)藥人工抗原合成成功后通常需要透析、過柱等方法對其進(jìn)行純化。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個目的在于提供有機磷類三唑磷農(nóng)藥的半抗原的制備方法，以1-苯基-3-羥基-1,2,4-三唑為原料，通過硝化、取代、還原和引入羧基活性基團反應(yīng)合成有機磷類三唑磷農(nóng)藥的半抗原，以利于制備出對有機磷類農(nóng)藥特異性強親和力高的抗體。

本發(fā)明的另一個目的在于提供一種有機磷類三唑磷農(nóng)藥半抗原。

為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：

一種有機磷類三唑磷農(nóng)藥的半抗原的制備方法，包括以下步驟：

(a)以1-苯基-3-羥基-1,2,4-三唑為原料，通過硝化反應(yīng)得到1-對硝基苯-3-羥基-1,2,4-三唑；

(b)將步驟(a)得到的1-對硝基苯-3-羥基-1,2,4-三唑和二乙基硫代磷酰氯進(jìn)行取代反應(yīng)，得到二乙基(1-對硝基苯-3-羥基-1,2,4-三唑)硫代磷酸酯；

(c)將步驟(b)得到的二乙基(1-對硝基苯-3-羥基-1,2,4-三唑)硫代磷酸酯進(jìn)行硝基還原反應(yīng)，得到二乙基(1-對氨基苯-3-羥基-1,2,4-三唑)硫代磷酸酯；

(d)將步驟(c)得到的二乙基(1-對氨基苯-3-羥基-1,2,4-三唑)硫代磷酸酯和丁二酸酐混合反應(yīng)，得到三唑磷4-(4-(3-二乙基硫代磷酸酯-1,2,4-三唑)-苯胺基)-4-氧代丁酸。

優(yōu)選地，所述硝化反應(yīng)包括以下步驟：

向1-苯基-3-羥基-1,2,4-三唑和濃硫酸的混合物中滴加發(fā)煙硝酸，滴加后于0～5℃攪拌4.5～5.5h，冷卻。