[發明專利]一種間充質干細胞培養基及其制備方法

在審

• 申請號: 202110086229.1
• 申請日: 2021-01-22
• 公開（公告）號: CN112458050A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 宮澤靜;溫軍海
• 申請（專利權）人: 宮澤靜;溫軍海
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 合肥市科融知識產權代理事務所(普通合伙) 34126
• 代理人: 陳飛

1.一種間充質干細胞培養基，其特征在于，包括以下組分原料：基礎培養基20-30g/L、堿性成纖維生長因子10-18ng/mL、表皮生長因子10-18ng/mL、L-谷氨酰胺3-5μg/L、金銀花粉2-4μg/L、川續斷皂苷VI4-8μM、亞硒酸鈉20-60ng/mL、青霉素90-110U/mL、鏈霉素90-110μg/mL。

2.如權利要求1所述的間充質干細胞培養基，其特征在于，所述基礎培養基為DMEM/F12培養基。

3.如權利要求1所述的間充質干細胞培養基，其特征在于，所述金銀花粉的制備過程為：取干燥的金銀花，稱量1g，用研磨器磨碎，然后過300目篩，即得。

4.如權利要求1所述的間充質干細胞培養基，其特征在于，包括以下組分原料：基礎培養基22-28g/L、堿性成纖維生長因子11-17ng/mL、表皮生長因子12-17ng/mL、L-谷氨酰胺3-5μg/L、金銀花粉2-4μg/L、川續斷皂苷VI5-8μM、亞硒酸鈉30-55ng/mL、青霉素95-105U/mL、鏈霉素93-106μg/mL。

5.如權利要求1所述的間充質干細胞培養基，其特征在于，包括以下組分原料：基礎培養基24-26g/L、堿性成纖維生長因子13-15ng/mL、表皮生長因子13-16ng/mL、L-谷氨酰胺3-4μg/L、金銀花粉3-4μg/L、川續斷皂苷VI6-8μM、亞硒酸鈉45-50ng/mL、青霉素96-102U/mL、鏈霉素98-102μg/m。

6.如權利要求1所述的間充質干細胞培養基，其特征在于，包括以下組分原料：基礎培養基25g/L、堿性成纖維生長因子15ng/mL、表皮生長因子14ng/mL、L-谷氨酰胺4μg/L、金銀花粉4μg/L、川續斷皂苷VI6μM、亞硒酸鈉50ng/mL、青霉素100U/mL、鏈霉素100μg/m。

7.如權利要求1-6任一項所述的間充質干細胞培養基的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、取400mL純化水加熱至50～60°C，然后向其中加入基礎培養基及L-谷氨酰胺，攪拌混合均勻，得混合物A；

S2、將步驟S1所得混合物A降溫至35～45°C，向其中加入金銀花粉、川續斷皂苷、亞硒酸鈉、青霉素和鏈霉素，混合攪拌均勻，得混合物B；

S3、將步驟S2制得的混合物B降溫至25～30°C，然后加入堿性成纖維生長因子和表皮生長因子，混合均勻，加入純化水，配制成1L的培養基；

S4、將培養基在含5%CO₂的細胞培養箱中平衡至pH值為7.4，即得。

8.如權利要求7所述的間充質干細胞培養基的制備方法，其特征在于，步驟S1所述攪拌混合均勻的條件為在150～250rpm的轉速下攪拌20～30min。

9.一種培養間充質干細胞的方法，其特征在于，將間充質干細胞接種于權利要求1至6任意一項所述的間充質干細胞培養基中進行培養。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，所述接種的密度為5×10⁴～8×10⁴個/mL。