[發明專利]一種表達人源ACE2的動物模型及其用途

有效

• 申請號: 202110080692.5
• 申請日: 2021-01-21
• 公開（公告）號: CN112680466B
• 公開（公告）日: 2023-08-18
• 發明（設計）人: 周澤鑫;李華鵬;張鈺;張超;王薇薇;李舸
• 申請（專利權）人: 廣州派真生物技術有限公司;廣東省實驗動物監測所
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N15/864;C12N7/01;A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 郭煒綿

1.一種表達人源ACE2的動物模型的構建方法，其特征在于是由以下步驟制得：

（1）將小鼠ACE2基因信號肽序列和人源ACE2基因成熟肽序列合并并經過密碼子優化，然后進一步合成克隆載體；設計引物，以克隆載體為模板擴增hACE2序列；

（2）酶切腺相關病毒載體，獲取線性化載體骨架，然后與hACE2序列進行同源重組反應，經轉化大腸桿菌獲得目的基因骨架表達載體pAAV-hACE2；

（3）輔助性質粒pHelper、血清型質粒pRep2Cap9、目的基因骨架表達載體pAAV-hACE2三質粒共轉染293T細胞，并通過梯度密度超速離心純化制備，獲取重組腺相關病毒AAV-hACE2；

（4）小鼠肺部插管噴射重組腺相關病毒AAV-hACE2，至少2周之后，獲得肺和腦組織高表達人源ACE2的小鼠模型；

所述的hACE2序列的核苷酸序列如SEQ.?ID.?NO.1所示；

步驟（4）中，肺部插管噴射的注射量為100μL，重組腺相關病毒AAV-hACE2的濃度為1×10^10?vg/μL；

步驟（2）所述的腺相關病毒載體為pAAV-GFP，使用AgeI、EcoRI酶切；

步驟（3）中，輔助性質粒pHelper、血清型質粒pRep2Cap9、目的基因骨架表達載體pAAV-hACE2的比例為1:1:2；

步驟（4）所述的小鼠為6-8周齡小鼠。

2.根據權利要求1所述的表達人源ACE2的動物模型的構建方法，其特征在于：步驟（1）所述引物的序列如SEQ.?ID.?NO.2和SEQ.?ID.?NO.3所示。

3.權利要求1-2任一項所述的表達人源ACE2的動物模型在構建新型冠狀肺炎COVID-19病理模型中的應用。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于：將SARS-Cov-2病毒對動物模型做滴鼻感染，獲得新型冠狀肺炎COVID-19病理模型；病毒濃度為1×10^5?PFU。