[發明專利]檢測菜豆莢斑駁病毒的交叉引物擴增引物組、試劑盒及應用

在審

• 申請號: 202110069957.1
• 申請日: 2021-01-19
• 公開（公告）號: CN112725530A
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發明（設計）人: 楊倩倩;王道;俞曉平;張蓬軍;孫凱;劉光富;尹傳林
• 申請（專利權）人: 中國計量大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 鄭海峰

1.一種檢測菜豆莢斑駁病毒的交叉引物擴增引物組，其特征在于，所述交叉引物擴增引物組由外圍置換引物BPBF、外圍置換引物BPBR、擴增引物BPDR、擴增引物BPMBR、交叉引物BPCPF組成；

所述外圍置換引物BPBF的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述外圍置換引物BPBR的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述擴增引物BPDR的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述擴增引物BPMBR的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述交叉引物BPCPF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

2.如權利要求1所述的檢測菜豆莢斑駁病毒的交叉引物擴增引物組，其特征在于，所述擴增引物BPDR的5’端有6-羧基熒光素標記，擴增引物BPMBR的5’端有生物素熒光基團標記。

3.如權利要求1所述的檢測菜豆莢斑駁病毒的交叉引物擴增引物組，其特征在于，所述外圍置換引物BPBF、外圍置換引物BPBR、擴增引物BPDR、擴增引物BPMBR和交叉引物BPCPF的摩爾比為：1：1：3：3：5。

4.一種檢測菜豆莢斑駁病毒的交叉引物恒溫擴增試劑，其特征在于，包括權利1-3任一項所述的交叉引物擴增引物組；

所述外圍置換引物BPBF和所述外圍置換引物BPBR在所述擴增試劑中的終濃度均為0.2μmol/L；

所述擴增引物BPDR和擴增引物BPMBR在所述擴增試劑中的終濃度均為0.6μmol/L；

所述交叉引物BPCPF在所述擴增試劑中的終濃度均為1μmol/L。

5.一種檢測菜豆莢斑斑駁病毒的交叉引物擴增試劑盒，其特征在于，包括權利要求1-3任一項所述的引物組或權利要求4所述的擴增試劑。

6.權利要求1-3任一項所述的引物組或權利要求4所述的擴增試劑或權利要求5所述的試劑盒在檢測待檢測樣品是否感染菜豆莢斑駁病毒中的應用。

7.一種檢測待測樣品是否感染菜豆莢斑駁病毒的方法，其特征在于包括如下步驟：

采用權利要求1-3任一項所述的引物組或權利要求4所述的擴增試劑或權利要求5所述的試劑盒對待測樣品進行交叉引物擴增，

利用熒光染料和實時熒光儀器進行實時監測，觀察熒光曲線；

若未出現擴增曲線，則待測樣品沒有菜豆莢斑駁病毒侵染；

若出現擴增曲線，則待測樣品為菜豆莢斑駁病毒感染。

8.一種檢測待測樣品是否感染菜豆莢斑駁病毒的方法，其特征在于包括如下步驟：

采用權利要求1-3任一項所述的引物組或權利要求4所述的擴增試劑或權利要求5所述的試劑盒對待測樣品進行交叉引物擴增，得到擴增產物；

用熒光標記核酸試紙條檢測試劑盒擴增產物，2-5min后觀察試紙條；

若在質控區出現一條條帶，在檢測區內無條帶出現，則待測樣品沒有菜豆莢斑駁病毒侵染；

若出現兩條條帶，一條位于檢測區內，另一條位于質控區內，則待測樣品為菜豆莢斑駁病毒感染。

9.根據權利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述交叉引物恒溫擴增反應條件為60℃，時間為90min。

10.根據權利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述交叉引物恒溫擴增的模板為RNA。