[發明專利]一種雙重信號增強的表面增強拉曼光譜檢測硫酸卡那霉素的方法

有效

• 申請號: 202110056967.1
• 申請日: 2021-01-15
• 公開（公告）號: CN112710649B
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發明（設計）人: 徐志祥;王汐沫;陳晨;徐龍華;孔非凡
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240
• 代理人: 薛鵬喜

1.一種雙重信號增強的表面增強拉曼光譜檢測體系，其特征在于，包括：與拉曼入射光共振耦合的金納米棒拉曼基底和核酸適配體控制的金屬摻雜碳量子點催化反應開關；

所述與拉曼入射光共振耦合的金納米棒拉曼基底由如下方法制備而成：

采用種子生長法合成大尺寸金納米棒，然后將合成的大尺寸金納米棒采用溶解液溶解5-10h；所述溶解液為含有CTAB和HAuCl₄·3H₂O的水溶液；將合成的大尺寸金納米棒采用溶解液溶解至縱向等離子體共振峰為785cm^-1；

所述種子生長法合成大尺寸金納米棒具體為：將CTAB溶液與HAuCl₄混合，再加入新鮮配制的NaBH₄溶液，充分攪拌后水浴靜置，得到種子溶液；將HAuCl₄、CTAB和抗壞血酸混合，作為生長溶液；采用三步種子生長法合成大尺寸金納米棒；

所述核酸適配體控制的金屬摻雜碳量子點催化反應開關由如下方法制備而成：

將核酸適配體與金屬摻雜碳量子點混合，再加入10～20μmol/L HAuCl₄溶液和0.05～0.2mol/L葡萄糖溶液，在55～85℃水浴中加熱20～45min，冷卻至室溫；在渦旋作用下加入4-MPBA溶液，孵育1-3h；

所述金屬摻雜碳量子點為鋅摻雜碳量子點。

2.根據權利要求1所述的雙重信號增強的表面增強拉曼光譜檢測體系，其特征在于，所述溶解液中，CTAB的含量為36.4mg/ml，HAuCl₄·3H₂O的含量為0.66mg/ml。

3.權利要求1或2所述的雙重信號增強的表面增強拉曼光譜檢測體系在抗生素檢測中的應用。

4.一種基于權利要求1或2所述的雙重信號增強的表面增強拉曼光譜檢測體系檢測硫酸卡那霉素的方法，包括以下步驟：

(1)將核酸適配體、金屬摻雜碳量子點與系列濃度梯度的硫酸卡那霉素標準溶液混合，再加入10～20μmol/L HAuCl₄溶液和0.05～0.2mol/L葡萄糖溶液，在55～85℃水浴中加熱20～45min，冷卻至室溫；在渦旋作用下加入4-MPBA溶液，孵育1-3h，離心，除去多余的4-MPBA，得到金屬摻雜碳量子點催化氧化還原反應釋放的金納米粒子；

(2)采用種子生長法合成大尺寸金納米棒，然后將合成的大尺寸金納米棒采用溶解液溶解至縱向等離子體共振峰為785cm^-1，作為拉曼基底；

(3)將步驟(1)制備的金屬摻雜碳量子點催化氧化還原反應釋放的金納米粒子與拉曼基底混合，35-40℃反應1-3h，反應結束后記錄495cm^-1處的拉曼強度；

(4)以硫酸卡那霉素標準溶液濃度的負對數值為橫坐標，495cm^-1處的拉曼強度為縱坐標繪制工作曲線；

(5)將待測溶液替換步驟(1)中的硫酸卡那霉素標準溶液，重復步驟(1)-(3)，利用步驟(4)繪制的工作曲線對待測溶液中的硫酸卡那霉素含量進行檢測；

步驟(1)中，所述核酸適配體的序列為5’-TGGGGGTTGAGGCTAAGCCGA-3’；

步驟(5)中，所述待測溶液由如下方法制備而成：

準確取1g樣品于離心管中，加入去離子水，渦旋混合后加入5％體積分數的磷酸溶液，震蕩提取5～10min，然后加入50％質量分數的三氯乙酸溶液，渦旋混合后離心；重復兩次并合并上清液，減壓濃縮后用去離子水復溶，0.22μm濾膜過濾，得待測溶液。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述硫酸卡那霉素標準溶液的濃度分別為10^-12g/mL、10^-11g/mL、10^-10g/mL、10^-9g/mL、10^-8g/mL、10^-7g/mL、10^-6g/mL、10^-5g/mL。