[發明專利]納米抗體及其編碼基因、表達載體、宿主細胞和應用

有效

• 申請號: 202110051956.4
• 申請日: 2021-01-15
• 公開（公告）號: CN112625132B
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 王天怡;姜海濤
• 申請（專利權）人: 沈陽榮欣生物制藥科技有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;A61K39/395;A61P35/00;C12N15/70;C12N15/81;G01N33/574;G01N33/68;C12R1/84;C12R1/19
• 代理公司: 北京匯捷知識產權代理事務所(普通合伙) 11531
• 代理人: 邢文月

本發明適用于生物基因技術領域，提供了一種納米抗體及其編碼基因、表達載體、宿主細胞和應用，該納米抗體為針對Siglec?15胞外特定區域的納米抗體，其包括至少一種氨基酸序列如SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.23所示的納米抗體。本發明針對Siglec?15獲得能夠與其胞外區域特異性結合的納米抗體，在研發Siglec?15治療性抗體，優選抗腫瘤抗體治療中具有巨大潛力。該納米抗體具有強而快的組織穿透能力，可以進入致密的實體瘤組織發揮作用；其分子結構較為簡單，可以通過大腸桿菌或酵母表達系統發酵生產，極大的降低生產成本。

技術領域

本發明屬于生物基因技術領域，尤其涉及一種納米抗體及其編碼基因、表達載體、宿主細胞和應用。

背景技術

癌癥是世界范圍內疾病死亡的主要原因，據國際抗癌聯盟統計，全球每年約有960萬人死于癌癥，遠超于艾滋病、結核病、瘧疾等疾病死亡病例的總和。而相關專家預估，到2030年，全球每年死于癌癥的人數將達到1300萬。免疫治療因其副作用小、抗腫瘤活性高、適應癥廣已成為繼手術、放療、化療等常規治療之后的第四大癌癥治療方式。PD1/PDL1免疫療法是當前備受矚目的抗癌免疫療法，腫瘤細胞表面高表達PDL1分子，其可以與T細胞表面表達到PD1分子結合，從而抑制T細胞活性，導致腫瘤免疫逃逸。通過抗體特異性結合PD1或者PDL1可以有效抑制該信號通路，繼而恢復被抑制的T細胞的活性，使癌細胞死亡。然而PD1-PDL1 在實體瘤的治療中只有不到40%的有效率，因為一些實體瘤不表達PDL1。2019年陳教授發現了在腫瘤細胞表面高表達的分子Siglec-15，其表達水平與PDL1互斥。即腫瘤表面有PDL1的表達，就沒有Siglec-15，有Siglec-15就沒有PDL1表達，以填補PDL1治療痛點。因此利用納米抗體特異性的與Siglec-15結合，封閉Siglec-15信號通路，可以減弱對活化T細胞的抑制作用，增強抗腫瘤的功能。

Siglec-15是一個唾液酸結合性免疫球蛋白樣凝集素家族（Siglec family）基因，在大多數正常人體組織和各種免疫細胞亞群中Siglec-15 mRNA的表達很少，但可以在巨噬細胞中表達。然而，在人多種腫瘤中，Siglec-15 mRNA表達量都上調。在241個人非小細胞肺癌樣本中，通過免疫組化分析，陳列平研究團隊發現Siglec-15可以在腫瘤細胞和腫瘤間質的巨噬/髓系細胞上檢測到。Siglec-15是一新的免疫調節靶點，在腫瘤微環境能抑制免疫反應。Siglec-15在腫瘤微環境中的M2型巨噬細胞以及在包括肺癌、卵巢癌和頭頸癌等在內多種人體腫瘤細胞中的表達上調，且其表達與B7-H1（PD-L1）是互斥的。Siglec-15 mRNA在大多數正常人體組織和各種免疫細胞亞群中均罕見表達，在腫瘤細胞、腫瘤間質細胞如腫瘤巨噬細胞和髓樣細胞中表達上調。因此在腫瘤細胞及腫瘤間質中巨噬細胞和髓樣細胞表面表達的Siglec-15均對活化的T細胞有抑制作用，因此要求Siglec-15的抗體不僅可以與癌細胞表面Siglec-15分子結合，抑制它對T細胞的滅活作用，還要求抗體分子可以快速、均勻分散在腫瘤內部組織及腫瘤間質中，從而有效封閉Siglec-15對T細胞的抑制作用。但是在先報道的Siglec-15單克隆抗體是完整的抗體分子，由于分子量大，很難快速、均勻分散在腫瘤內部組織及腫瘤間質中，且結構復雜，適于用細胞表達，生產成本高。

單域抗體最初是從駱駝科動物體內發現的天然缺失抗體輕鏈和重鏈恒定區的重鏈抗體，現在可以由人源化的噬菌體納米抗體庫篩選獲得。其分子量大小是完整抗體的1/12，晶體直徑2.5nm，長4nm，因此又稱為納米抗體。納米抗體具有高親和性和特異性等特點。人源的納米抗體還具有免疫原性低、溶解性和穩定性較好等特點，因此更適合于治療應用。