[發(fā)明專利]復方氨基酸溶液中色氨酸雜質(zhì)的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110051591.5
• 申請日: 2021-01-14
• 公開（公告）號: CN112858556B
• 公開（公告）日: 2022-11-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 何翠翠;葉向暉
• 申請（專利權(quán)）人: 費森尤斯卡比華瑞制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務(wù)所(普通合伙) 32104
• 代理人: 曹祖良

本發(fā)明提供一種復方氨基酸溶液中色氨酸雜質(zhì)的檢測方法，包括如下步驟：（1）將色氨酸對照品溶于溶劑中，得到色氨酸雜質(zhì)對照品溶液，以溶劑為空白溶液，將空白溶劑注入液相色譜儀，直至基線平穩(wěn)，再取對照品工作溶液注入液相色譜儀進行檢測；（2）將樣品溶于溶劑中，得到供試品溶液，將供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，用外標法對色氨酸單個雜質(zhì)進行計算，并計算雜質(zhì)總量。本發(fā)明公開了一種測定復方氨基酸溶液中色氨酸總雜的檢測方法，對于一些特定的色氨酸降解雜質(zhì)，本方法也能夠準確檢出，不會受到復方氨基酸中其他成分的干擾，并滿足各雜質(zhì)間的分離度符合色譜系統(tǒng)適用性的要求，樣品處理簡單、方便，測樣結(jié)果準確可靠、靈敏度高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及色氨酸雜質(zhì)測定技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種復方氨基酸溶液中色氨酸雜質(zhì)的檢測方法。

背景技術(shù)

眾所周知，氨基酸溶液顏色的改變主要由于色氨酸的降解。在復方氨基酸溶液中色氨酸降解導致溶液顏色變黃，因此對復方氨基酸中色氨酸雜質(zhì)的研究與控制不可避免。

目前現(xiàn)有的分析方法多為控制色氨酸單雜或幾個特定雜質(zhì)檢測的HPLC法，并不能全面客觀反映溶液中的色氨酸總雜情況。為了能更客觀反映復方氨基酸溶液中的色氨酸雜質(zhì)，本發(fā)明試圖建立一種新的HPLC方法。

本方法在用HPLC法檢測所有色氨酸雜質(zhì)的基礎(chǔ)上，進行了目前公認的幾種色氨酸特定雜質(zhì)的檢測，各雜質(zhì)可被檢出，且不受復方氨基酸中其他成分的影響，各雜質(zhì)間分離度良好(大于1.5)，滿足色譜系統(tǒng)適用性的要求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種復方氨基酸溶液中色氨酸雜質(zhì)的檢測方法，建立更加全面、客觀、高效地控制復方氨基酸溶液中色氨酸總雜的的檢測方法。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

一種復方氨基酸溶液中色氨酸雜質(zhì)的檢測方法，其中，包括如下步驟：

(1)將色氨酸對照品溶于溶劑中，得到色氨酸雜質(zhì)對照品溶液，以溶劑為空白溶液，將空白溶劑注入液相色譜儀，直至基線平穩(wěn)，再取色氨酸雜質(zhì)對照品溶液注入液相色譜儀進行檢測；

(2)將樣品溶于溶劑中，得到供試品溶液，將供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，用外標法對色氨酸單個雜質(zhì)進行計算，并計算雜質(zhì)總量。

優(yōu)選的是，所述的復方氨基酸溶液中色氨酸雜質(zhì)的檢測方法，其中，所述流動相流速為1.0～1.4ml/min，進樣量：20～25μl，柱溫：30℃～35℃，采用流動相A和流動相B進行梯度洗脫，采用紫外檢測器進行檢測，檢測波長為270nm。

優(yōu)選的是，所述的復方氨基酸溶液中色氨酸雜質(zhì)的檢測方法，其中，所述流動相A為0.1％～0.2％甲酸的水溶液，流動相B為0.1％～0.15％甲酸的乙腈溶液。

優(yōu)選的是，所述的復方氨基酸溶液中色氨酸雜質(zhì)的檢測方法，其中，所述甲酸為分析純，乙腈為色譜純，水為電阻率18.6Ω的超純水。

優(yōu)選的是，所述的復方氨基酸溶液中色氨酸雜質(zhì)的檢測方法，其中，所述梯度洗脫過程如下：

優(yōu)選的是，所述的復方氨基酸溶液中色氨酸雜質(zhì)的檢測方法，其中，所述色氨酸雜質(zhì)對照品溶液的濃度為0.13～0.16μg/ml。

色氨酸對照品溶液的配制：

a1.色氨酸對照品貯備液的配制(285μg/ml)：稱取色氨酸對照約47.5mg至25ml容量瓶中，乙腈：0.1M HCl＝3:7(v/v)稀釋至刻度，精密量取3ml至20ml量瓶，水稀釋至刻度，搖勻；

A2.色氨酸雜質(zhì)對照品溶液的配制(0.1425μg/ml)：精密量取色氨酸對照品貯備液1ml至50ml量瓶，水稀釋至刻度；精密量取2.5ml至100ml量瓶，水稀釋至刻度，搖勻。