[發明專利]基于一步法RT-PCR技術檢測或輔助檢測南方番茄病毒的引物對和方法

在審

• 申請號: 202110051440.X
• 申請日: 2021-01-14
• 公開（公告）號: CN112626275A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 邱艷紅;徐秀蘭;張海軍;田文;趙桂新
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 張羽

本發明公開了基于一步法RT?PCR技術檢測或輔助檢測南方番茄病毒的引物對、RT?PCR試劑、RT?PCR試劑盒及其應用和方法。該引物對由引物STV?812?F和引物STV?812?R組成；所述STV?812?F為如下(a1)或(a2)；(a1)序列表的SEQ ID No.1所示的單鏈DNA分子；(a2)將SEQ ID No.1經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與SEQ ID No.1具有相同功能的DNA分子；所述STV?812?R為如下(a3)或(a4)；(a3)序列表的SEQ ID No.2所示的單鏈DNA分子；(a4)將SEQ ID No.2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與SEQ ID No.2具有相同功能的DNA分子。該引物對能夠特異性擴增南方番茄病毒，由此可鑒定出番茄種子或植株上是否攜帶該病毒病害。

技術領域

本發明涉及屬于植物病毒技術領域，涉及生物檢測技術，具體涉及基于一步法RT-PCR技術檢測或輔助檢測南方番茄病毒的引物對、RT-PCR試劑、RT-PCR試劑盒及其應用和方法。

背景技術

南方番茄病毒(southern tomato virus，STV)屬Amalgaviridae科Amalgavirus屬，基因組為一條雙鏈RNA，是近幾年來番茄上新發生的病毒病害。2005年，最早發現于墨西哥西南部和密西西比東北部的番茄上。我國最早于2011年在新疆地區的番茄上發現，隨后在山東壽光，北京的番茄樣品中也檢測到了該病毒。STV直接引發的番茄癥狀尚不明確，但可以與番茄褪綠病毒、番茄花葉病毒、番茄黃化曲葉病毒、番茄斑萎病毒等高度復合侵染，引發植株褪綠、黃化、衰退、果實變小等癥狀，造成嚴重損失。STV是嚴格種傳病毒，不能通過汁液摩擦和嫁接技術進行傳播。因此加強對該病毒的檢測鑒定，做好種子帶毒檢測工作，對我國番茄的安全生產具有重要意義。

發明內容

本發明所要解決的技術問題為如何檢測或輔助檢測南方番茄病毒、或如何檢測或輔助檢測待測植物樣本是否感染南方番茄病毒。

為了解決上述技術問題，本發明提供用于檢測或輔助檢測南方番茄病毒的引物對，由引物STV-812-F和引物STV-812-R組成。

所述STV-812-F為如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的SEQ ID No.1所示的單鏈DNA分子；

(a2)將SEQ ID No.1經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與SEQID No.1具有相同功能的DNA分子。

所述STV-812-R為如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的SEQ ID No.2所示的單鏈DNA分子；

(a4)將SEQ ID No.2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與SEQID No.2具有相同功能的DNA分子。

本發明還提供了用于檢測或輔助檢測南方番茄病毒的試劑，所述試劑含有上述引物對。

可選地，上述試劑中，所述引物STV-812-F和引物STV-812-R的摩爾比為1∶1。

可選地，上述試劑還包括反轉錄酶(Reverse Transcriptase)，DNA聚合酶(DNAPolymerase)和無菌水。根據需要還可包括陽性對照樣品，所述陽性對照樣品具體可為感染南方番茄病毒的植物葉片。

本發明還提供了用于檢測或輔助南方番茄病毒的試劑盒，所述試劑盒含有上述的引物對或上述的試劑。

上文中的所述試劑具體可為RT-PCR擴增試劑。上文中的所述試劑盒具體可為RT-PCR擴增試劑盒。

上述引物對、上述的試劑以及上述試劑盒的應用也在本發明的保護范圍內。

可選地，該應用為在如下(b1)-(b6)中的任一種應用：