[發明專利]耐受阿魏酸和香草酸的解脂耶氏酵母工程菌及其構建方法

有效

• 申請號: 202110049160.5
• 申請日: 2021-01-14
• 公開（公告）號: CN112625932B
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發明（設計）人: 金明杰;王澤迪;周琳琳;許召賢
• 申請（專利權）人: 南京理工大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/31;C12N15/81;C12R1/645
• 代理公司: 南京理工大學專利中心 32203
• 代理人: 劉海霞

1.耐受阿魏酸和香草酸的解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）工程菌，其特征在于，為過量表達YALI0_E25201g、YALI0_B18854g和YALI0_F16731g中至少一種的解脂耶氏酵母工程菌，目的基因YALI0_E25201g、YALI0_B18854g、YALI0_F16731g以解脂耶氏酵母Y. lipolytica XYL+基因組為模板擴增，目的基因YALI0_E25201g的上游引物為GTATAAGAATCATTCAAAGGCGCGCCatgtcttcttcaatactaacacagactgg，下游引物為CTAATTACATGAGGCTAGCgtttaaactcacttgttgaagtctacctcg，目的基因YALI0_B18854g的上游引物為GAGTATAAGAATCATTCAAAGGCGCGCCatgaaccccactatcgaacg，下游引物為CTAATTACATGAGGCTAGCgtttaaacctaatcgtatcgaacagctcg，目的基因YALI0_F16731g的上游引物為GTATAAGAATCATTCAAAGGCGCGCCatggcgacagtacgagtacttcg，下游引物為CTAATTACATGAGGCTAGCgtttaaacctaaaaatgcaaaggcagctg。

2.根據權利要求1所述的解脂耶氏酵母工程菌的構建方法，其特征在于，步驟如下：首先構建含YALI0_E25201g、YALI0_B18854g和YALI0_F16731g基因中至少一種的基因表達框，將構建的基因表達框以多拷貝質粒的形式導入解脂耶氏酵母或者直接整合到解脂耶氏酵母基因組。

3.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，多拷貝質粒載體為附加型載體或整合表達載體。

4.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，多拷貝質粒載體為pMCS-CEN1。

5.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，多拷貝質粒載體含有在解脂耶氏酵母中具有較強活性的啟動子。

6.根據權利要求5所述的構建方法，其特征在于，所述的啟動子為強啟動子pTEFin。

7.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，所述的解脂耶氏酵母為解脂耶氏酵母菌Y. lipolytica XYL+、解脂耶氏酵母菌po1f、解脂耶氏酵母菌po1d或解脂耶氏酵母菌W29。

8.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，將構建的基因表達框以多拷貝質粒的形式導入解脂耶氏酵母的具體方法為：將含目的基因YALI0_E25201g、YALI0_B18854g和YALI0_F16731g中的一種或兩種以上的表達框通過SgsI和MssI酶切位點與過量表達載體pMCS-CEN1連接，過量表達載體以SUC基因作為篩選標記。