[發明專利]非洲豬瘟病毒三重熒光PCR檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202110048006.6
• 申請日: 2021-01-14
• 公開（公告）號: CN112375849A
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發明（設計）人: 劉河冰;曹罡;王程玉;李蓉蓉;邱增枝
• 申請（專利權）人: 北京明日達科技發展有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.非洲豬瘟病毒三重熒光PCR檢測試劑盒，包括熒光PCR反應液、陽性對照、陰性對照、外源基因標準液、陰性提取對照液；所述熒光PCR反應液包含2×TaqMan? Fast AdvancedMaster Mix及VP72基因、外源基因、內源基因的上、下游引物和探針，其中，VP72基因為非洲豬瘟病毒結構蛋白VP72基因片段，外源基因為人工合成的特異性基因片段（WY基因）、內源為豬肌動蛋白β-actin基因片段（Pactin基因），上述三對特異性引物序列為：

VP72-F：5’-GTGGAAGGGTATGTAAGAGCTG-3’，如SEQ ID NO.1所示；

VP72-R：5’-AATGTTTTTAATAATAGGTAATGTG-3’，如SEQ ID NO.2所示；

WY-F：5’-CGGGTGATTCGCAAGATCTTG-3’，如SEQ ID NO.3所示；

WY-R：5’-CCAGTGTAGAGAAGGAAAAT-3’ ，如SEQ ID NO.4所示；

Pactin-F：5’-TTGTCATGGACTCTGGGGATGG-3’，如SEQ ID NO.5所示；

Pactin-R：5’-AGTCCTGCGGCATCCACGAGACCA-3’，如SEQ ID NO.6所示；

特異性探針序列為：

VP72-P：5’-FAM-TTGATGGAAACTTATCGATAAGATTG-TAMRA-3’，如SEQ ID NO.7所示；

WY-P：5’-VIC-GCAGGTCTGTCCGTTCAACAGGGGAT-BHQ1-3’，如SEQ ID NO.8所示；

Pactin-P：5’-ROX-TCACCGCTTCCGGTGTCCAGAGGC-BHQ2-3’，如SEQ ID NO.9所示，其中，VP72基因探針、WY基因探針、Pactin基因探針中的FAM、VIC、ROX為熒光報告基團，TAMRA、BHQ1、BHQ2為熒光淬滅基團。

2.根據權利要求1所述非洲豬瘟病毒三重熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于所述非洲豬瘟病毒結構蛋白VP72基因片段的核苷酸序列為：

TTAGGTACTGTAACGCAGCACAGCTGAACCGTTCTGAAGAAGAAGAAAGTTAATAGCAGATGCCGATACCACAAGATCAGCCGTAGTGATAGACCCCACGTAATCCGTGTCCCAACTAATATAAAATTCTCTTGCTCTGGATACGTTAATATGACCACTGGGTTGGTATTCCTCCCGTGGCTTCAAAGCAAAGGTAATCATCATCGCACCCGGATCATCGGGGGTTTTAATTGCATTGCCTCCGTAGTGGAAGGGTATGTAAGAGCTGCAGAACTTTGATGGAAACTTATCGATAAGATTGATACCATGAGCAGTTACGGAAATGTTTTTAATAATAGGTAATGTGATCGGATACGTAACGGGGCTAATATCCGATATAGATGAACATGCGTCTGGAAGAGCTGTATCTCTATCCTGAAAGCTTATCTCTGCGTGGTGAGTAGGCTGCATAATGGCGTTAACAACATGTCCGAACTTGTGCCAATCTCGGTGTTGATGAGGATTTTGATCGGAGATGTTC，如SEQ IDNO.10所示；

所述人工合成的特異性基因片段的核苷酸序列為：

ATAGTCCTAATCCCGGGTGATTCGCAAGATCTTGACAGCAGGTCTGTCCGTTCAACAGGGGATTGTTCGGCAAAGAGTCATCCCAGTGTAGAGAAGGAAAATTGTAGACGAAGGGTCGAAAGCTCAAGGACAATTAGGCTGGTTGGAGAATAAAGATATTGACTTTTCTTGGAAAGTGGCGCAGTCAAGTATTTGGAAGGGCACGGGTTCCGTTTTGAAGTCAAGAATAGACATAGAAGTTGATGATGCTGAGCAATTCAATATCTTGCTAGCTTCCATCTTGGCTCAAATTTGGGCGTGATGGAGTGAAGCGCCTT，如SEQ ID NO.11所示；

所述豬肌動蛋白β-actin基因片段的核苷酸序列為：

AGACCTTCAACACGCCGGCCATGTACGTGGCCATCCAGGCCGTGCTGTCCCTGTACGCCTCTGGCCGCACCACTGGCATTGTCATGGACTCTGGGGATGGGGTCACCGCTTCCGGTGTCCAGAGGCGCTCTTCCAGCCCTCCTTCTTGGGCATGGAGTCCTGCGGCATCCACGAGACCACCTTCAACTCGATCATGAAGTGCGACGTGGACATCAGGAAGGACCTCTACGCCAACACGGTGCTGTCTGGCGGGAC，如SEQ ID NO.12所示。