[發明專利]清腦復神液高效液相色譜串聯質譜檢測方法

在審

• 申請號: 202110037888.6
• 申請日: 2021-01-12
• 公開（公告）號: CN114764090A
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發明（設計）人: 陳志釗;殷瑋;周蘭華;張志堅;宮劍平;戚園梅;彭佳裕
• 申請（專利權）人: 廣州白云山花城藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/02;G01N30/86
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 程躍華

1.清腦復神液高效液相色譜串聯質譜檢測方法，采取清腦復神液中10種有效成分葛根素、芍藥苷、柚皮苷、橙皮苷、黃芩苷、小檗堿、細葉遠志皂苷、黃芩素、大黃素、大黃酚濃度的高效液相色譜串聯質譜檢測方法，包括以下步驟：

(1)儲備溶液的制備：

取標準品葛根素、芍藥苷、柚皮苷、橙皮苷、黃芩苷、小檗堿、細葉遠志皂苷、黃芩素、大黃素、大黃酚，分別溶解于100％甲醇溶液中，制得標準品儲備溶液；將標準品儲備溶液混合，得到混合標準品儲備溶液；

(2)工作溶液的制備：

分別用40±5％乙腈水溶液稀釋所述混合標準品儲備溶液，制得混合標準曲線樣本工作溶液和混合質控樣本工作溶液；

(3)待測樣品進樣溶液的制備：

待測樣品溶液的制備：取清腦復神液，加入適量的40±5％乙腈水溶液稀釋到合適的濃度，渦旋混勻，之后過0.22μm的微孔濾膜，濾液即為待測樣品進樣溶液；

(4)將步驟(3)所得待測樣品進樣溶液進行液相色譜分離；將液相色譜分離后的樣品進行質譜分析；

(5)液相色譜條件包括：

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；

流速：0.3±0.05mL/min；

進樣體積：3.00±0.5μL；

柱溫：40±5℃；

自動進樣器溫度：4±4℃；

洗針液：50±5％乙腈水溶液；

洗沖速度：30-40μL/sec；

洗針液體積：400-600μL；

液相色譜分離所采用的洗脫方式為：以0.1±0.02％甲酸水溶液為流動相A，以乙腈為流動相B，進行梯度洗脫，梯度洗脫的過程包括：

0.0～0.5分鐘，流動相B：40±5％→40±5％；

0.5～1.0分鐘，流動相B：40±5％→95±5％；

1.0～2.0分鐘，流動相B：95±5％→95±5％；

2.0～2.2分鐘，流動相B：95±5％→40±5％；

2.2～3.0分鐘，流動相B：40±5％→40±5％。

(6)質譜分析條件包括：

離子化模式：電噴霧離子源；正負離子同時檢測模式；多反應監測；

離子源參數：氣簾氣：20psi；離子源氣體1：30psi；離子源氣體2：30psi；

離子源噴霧電壓：正離子模式5500±10V，負離子模式-4500±10V；

離子源溫度：500±10℃；

分辨率Q1/Q3：Unit/Unit；

碰撞氣：Medium；

暫停時間：20±1msec；

質譜采集時間為3.00±0.2min；

各成分的四級桿質譜條件為：

葛根素：離子模式：ESI+；離子對：417.2→297.1；去簇電壓：100.0V；入口電壓：10.00V；出口電壓：25.00V；碰撞能量：39.00eV；停留時間：50.0msec；

芍藥苷：離子模式：ESI-；離子對：525.2→449.3；去簇電壓：-100.0V；入口電壓：-10.00V；出口電壓：-16.00V；碰撞能量：-19.00eV；停留時間：50.0msec；

柚皮苷：離子模式：ESI-；離子對：579.2→270.9；去簇電壓：-100.0V；入口電壓：-10.00V；出口電壓：-16.00V；碰撞能量：-47.00eV；停留時間：50.0msec；

橙皮苷：離子模式：ESI-；離子對：609.2→301.2；去簇電壓：-100.0V；入口電壓：-10.00V；出口電壓：-16.00V；碰撞能量：-32.00eV；停留時間：50.0msec；

黃芩苷：離子模式：ESI+；離子對：447.1→271.1；去簇電壓：100.0V；入口電壓：10.00V；出口電壓：25.00V；碰撞能量：35.00eV；停留時間：50.0msec；

小檗堿：離子模式：ESI+；離子對：336.1→320.0；去簇電壓：100.0V；入口電壓：10.00V；出口電壓：25.00V；碰撞能量：35.00eV；停留時間：50.0msec；

細葉遠志皂苷：離子模式：ESI-；離子對：679.4→455.3；去簇電壓：-100.0V；入口電壓：-10.00V；出口電壓：-16.00V；碰撞能量：-44.00eV；停留時間：50.0msec；

黃芩素：離子模式：ESI-；離子對：269.1→240.8；去簇電壓：-100.0V；入口電壓：-10.00V；出口電壓：-16.00V；碰撞能量：-31.00eV；停留時間：50.0msec；

大黃素：離子模式：ESI-；離子對：269.1→225.0；去簇電壓：-100.0V；入口電壓：-10.00V；出口電壓：-16.00V；碰撞能量：-38.00eV；停留時間：50.0msec；

大黃酚：離子模式：ESI-；離子對：253.1→225.1；去簇電壓：-100.0V；入口電壓：-10.00V；出口電壓：-16.00V；碰撞能量：-38.00eV；停留時間：100.0msec。

2.根據權利要求1所述的清腦復神液高效液相色譜串聯質譜檢測方法，其特征在于，所采用的液相色譜質譜聯用儀的型號為Shimadzu LC 30AD液相色譜儀聯合Sciex Qtrap5500質譜儀，所采用的操作系統為Analyst 1.6.3；所采用的液相色譜柱為：ACQUITYBEH C18，2.1×50mm,1.7μm,Waters。