[發明專利]植物蛋白多肽在玻璃化冷凍液中的應用、玻璃化冷凍液組合物及制備方法

有效

• 申請號: 202110035123.9
• 申請日: 2021-01-12
• 公開（公告）號: CN112772634B
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發明（設計）人: 孟松;劉佳亮;李娜;譚良志
• 申請（專利權）人: 臺州靈江生物技術有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 藍天知識產權代理(浙江)有限公司 33229
• 代理人: 孫煒

1.玻璃化冷凍液組合物，其特征在于，由平衡液、冷凍液和解凍液組成；

所述平衡液以M199-hepes為基礎液，添加以下各組分后配制而成：

二甲基亞砜 75mL/L

乙二醇 75mL/L

蔗糖 0.5mol/L

植物蛋白多肽溶液 10mL/L；

所述冷凍液以M199-hepes為基礎液，添加以下各組分后配制而成：

二甲基亞砜 150mL/L

乙二醇 150mL/L

蔗糖 1 mol/L

植物蛋白多肽溶液 10 mL/L；

所述解凍液由解凍液1和解凍液2組成，分別以M199-hepes為基礎液，添加以下各組分后配制而成：

解凍液1各組分濃度：

蔗糖 1mol/L

植物蛋白多肽溶液 10mL/L；

解凍液2各組分濃度：

蔗糖 0.5mol/L

植物蛋白多肽溶液 10mL/L；

所述植物蛋白多肽溶液通過以下方法制備而成：

取大豆蛋白粉500g，投入5kg濃度0.05M pH7.2的磷酸緩沖液中，加入25g吐溫80，37℃快速攪拌使蛋白分散均勻；加入酶活力為100萬單位/g的木瓜蛋白酶5g，37℃保溫反應6小時；使植物蛋白酶解成分子量為60000～80000道爾頓的植物蛋白多肽，之后升溫至90℃～100℃滅酶，降至室溫，反應液用微濾膜透析，收集透析液，用截留分子量5000道爾頓的超濾膜濃縮，收集濃縮液；Bradford法測量蛋白含量，用濃度0.05M pH7.2的磷酸緩沖液稀釋至蛋白含量為60mg/mL。

2.如權利要求1所述的玻璃化冷凍液組合物作為胚胎玻璃化冷凍組合物的應用，其特征在于，植物蛋白多肽為冷凍液提供合適的粘度、滲透壓以及接近人血清白蛋白的環境，所述植物蛋白多肽的分子量為60000～80000道爾頓。