[發(fā)明專利]一種維持羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞活性的保存液及保存方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110026918.3
• 申請日: 2021-01-09
• 公開（公告）號: CN112841170A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于威;陳美珠
• 申請（專利權(quán)）人: 于威
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種維持羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞活性的保存液，包括以下重量份的原料：質(zhì)量濃度0.5?0.9％的氯化鈉溶液90?100份、綠豆蛋白1?5份、內(nèi)啡肽0.5?1份、蘿卜硫素0.1?0.5份、L?茶氨酸5?10份、L?苯丙氨酸2?8份、L?色氨酸5?10份。本發(fā)明提供的保存液中添加綠豆蛋白、內(nèi)啡肽及蘿卜硫素協(xié)同為細(xì)胞提供保護(hù)作用，和保存液中為細(xì)胞提供能量的氨基酸以及維持細(xì)胞外滲透壓的氯化鈉溶液共同發(fā)揮作用，細(xì)胞在4?10℃保存48h后細(xì)胞的活率大于90％，并且本發(fā)明的保存液成分明確，使用安全。本發(fā)明還提供了一種羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的保存方法，采用本發(fā)明的保存液，針對傳代培養(yǎng)得到的羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行保存，有效延長細(xì)胞的保存時(shí)間，為羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的長距離運(yùn)輸提供保障。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種保存液，尤其涉及一種維持羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞活性的保存液及保存方法。

背景技術(shù)

人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞具有高度自我更新、增殖、可植入性和多系分化能力，異基因個體移植后無免疫排斥和致瘤性風(fēng)險(xiǎn)。而且，人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞來源于產(chǎn)婦分娩后廢棄的胎盤，應(yīng)用到臨床不會帶來醫(yī)學(xué)倫理爭議。羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞可用來進(jìn)行諸多疾病的細(xì)胞治療、組織器官損傷的修復(fù)與重建，是再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域理想的種子細(xì)胞資源，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。

羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞治療涉及細(xì)胞的制備、擴(kuò)增、回輸?shù)冗^程，通常這些過程的實(shí)施地點(diǎn)及時(shí)間并不一致，從而需要把細(xì)胞運(yùn)輸?shù)侥康牡兀谶\(yùn)輸過程中需要細(xì)胞保存液來維持細(xì)胞活性。目前國內(nèi)可以大量提供人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的機(jī)構(gòu)通常是采用生理鹽水或者細(xì)胞培養(yǎng)基作為臨床間充質(zhì)干細(xì)胞應(yīng)用時(shí)的溶液介質(zhì)。如果將人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增后，立即給病人應(yīng)用，生理鹽水是方便安全的，但是羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞在生理鹽水中活力下降的速度非常快，單純用生理鹽水保存細(xì)胞2小時(shí)后細(xì)胞活力就會降低10％左右，因此只適用于細(xì)胞的即時(shí)使用。

現(xiàn)有的細(xì)胞保存液為提高保存時(shí)間會加入了外源物質(zhì)，會影響其安全性，同時(shí)現(xiàn)有保存液維持細(xì)胞活力的時(shí)間不能滿足使用需求。在現(xiàn)有技術(shù)的細(xì)胞保存液中可以保持90％以上活力僅24個小時(shí)，并且隨著時(shí)間延長，細(xì)胞活力下降，那么就意味著超過24小時(shí)，細(xì)胞活力將下降到90％以下，然而羊膜干細(xì)胞治療及臨床試驗(yàn)已經(jīng)在國內(nèi)多數(shù)城市及國外多個國家開展，利用現(xiàn)有的交通工具，24小時(shí)的活力維持時(shí)間明顯限制了羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用范圍。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的之一在于提供一種維持羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞活性的保存液，有效延長細(xì)胞的保存時(shí)間，并且成分簡單明確，使用安全。

本發(fā)明的目的之二在于一種羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的保存方法。

本發(fā)明的目的之一采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種維持羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞活性的保存液，包括以下重量份的原料：質(zhì)量濃度0.5-0.9％的氯化鈉溶液90-100份、綠豆蛋白1-5份、內(nèi)啡肽0.5-1份、蘿卜硫素0.1-0.5份、L-茶氨酸5-10份、L-苯丙氨酸2-8份、L-色氨酸5-10份。

進(jìn)一步地，上述維持羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞活性的保存液，包括以下重量份的原料：質(zhì)量濃度0.7％的氯化鈉溶液95份、綠豆蛋白3份、內(nèi)啡肽0.8份、蘿卜硫素0.2份、L-茶氨酸8份、L-苯丙氨酸5份、L-色氨酸8份。

本發(fā)明的目的之二采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的保存方法，采用上述的保存液。

進(jìn)一步地，所述羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的保存方法包括將羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞重懸于保存液中，在4-10℃條件下保存。

進(jìn)一步地，所述保存液中羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的濃度為1-4×10⁶個/mL。

進(jìn)一步地，所述羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞為傳代培養(yǎng)的P2-P10代細(xì)胞。