[發明專利]一種木瓜酶制劑的高效制備方法

在審

• 申請號: 202110026367.0
• 申請日: 2021-01-08
• 公開（公告）號: CN112813057A
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 白新鵬;劉亞文;黃慶成
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: C12N9/50
• 分類號: C12N9/50;C12N9/20
• 代理公司: 海南盛億專利代理事務所(普通合伙) 46005
• 代理人: 吳燕梅

本發明涉及一種木瓜酶制劑的高效制備方法，其包括以下具體操作步驟：S1、木瓜酶制劑粗品的制備；S2、木瓜蛋白酶粗酶制品溶液和木瓜脂肪酶粗酶制品的制備；S3、木瓜脂肪酶制劑的制備；S4、木瓜蛋白酶的分離純化。本發明實施例所述木瓜酶制劑的高效制備方法，其能夠同時自木瓜原漿中分離純化得到木瓜蛋白酶和木瓜脂肪酶，實現了資源的完整利用，制備步驟精簡且設計合理，操作簡單，制備過程中對酶的活性影響較小，制取得到的木瓜蛋白酶和木瓜脂肪酶純度高、活性高且酶活性回收率高，且經強陽離子交換法分離后還能夠對試劑進行回收，以便進行重復利用，有效降低成本，可擴大化制備，滿足工業化需求。

技術領域

本發明涉及生化分離技術領域，特別是涉及一種木瓜酶制劑的高效制備方法。

背景技術

木瓜乳中具有木瓜蛋白酶、木瓜肽酶B、木瓜凝乳蛋白酶A、木瓜凝乳蛋白酶B等豐富的酶類。

木瓜蛋白酶具有耐高溫、穩定性好、水解能力強、對PH變化和金屬離子及去垢劑不敏感等特征，能用于水解各類蛋白質，目前已廣泛地應用于食品、化工、輕紡工業、醫藥衛生等各個領域，與此同時，對木瓜蛋白酶的各種研究也日益增多，而研究、探討、尋求最佳提取工藝對木瓜蛋白酶的開發、制備和應用具有極其重要的意義。目前提取木瓜蛋白酶的傳統方法有：超濾法、鹽析法、有機溶劑法、絮凝法、親和層析法等。

木瓜脂肪酶(Carica papaya lipase，CPL)是木瓜蛋白酶生產的副產物，CPL以固體形式存在降低了木瓜蛋白酶的純度，但CPL在木瓜中含量豐富，番木瓜脂肪酶粗酶干重占木瓜汁質量的15％左右，且其酶活水平較高，同時具有優良的性質，如在有機溶劑中的熱穩定性高，在飽和異辛院中60℃下仍具有90％的酶活，因此受到國內外學者的重視。但是現有技術中分離純化番木瓜脂肪酶的操作較為復雜，較為常用的CPL的提取方法主要是通過緩沖液反復洗滌去除木瓜乳中的水溶性蛋白酶類，離心回收CPL，CPL的得率為木瓜乳重量的2.50％左右，脂肪酶酶活為350U/g左右。該方法雖然可以完全去除木瓜乳中的水溶性的酶類，但是需要耗費大量的水電，且處理量小，一般僅適用于實驗室及樣品試制，難以適應產業化制備的要求。同時，該方法將水溶性蛋白酶類有效成分作為廢棄物，造成較大的資源浪費。

發明內容

基于此，本發明實施例的目的在于，提供一種木瓜酶制劑的高效制備方法，其具有操作簡單、成本低且所提取的酶活性高的優點。

本發明實施例是通過以下技術方案獲得上述目的的：

一種木瓜酶制劑的高效制備方法，其包括以下具體操作步驟：

S1、木瓜酶制劑粗品的制備

選取當天采集的新鮮木瓜制成木瓜漿，并在木瓜漿中加入固體亞硫酸鈉，在室溫下攪拌至完全溶解，調節pH至5.5-6.0，冷凍干燥后得到所述木瓜酶制劑粗品；

S2、木瓜蛋白酶粗酶制品溶液和木瓜脂肪酶粗酶制品的制備

將步驟S1制得的木瓜酶制劑粗品溶解于L-半胱氨酸溶液中，攪拌混合均勻；所得混合液離心處理后用定性分析濾紙過濾，所得濾液即為所述木瓜蛋白酶粗酶制品溶液，所得沉淀即為所述木瓜脂肪酶粗酶制品；

S3、木瓜脂肪酶制劑的制備

向步驟S2所得木瓜脂肪酶粗酶制品中加入pH＝5.5的磷酸緩沖液，攪拌均勻后離心處理，除去上清液，收集沉淀，重復上述操作若干次，所得沉淀冷凍干燥后得到的凍干粉即為所述木瓜脂肪酶制劑；

S4、木瓜蛋白酶的分離純化