[發明專利]一種羽扇豆醇衍生物及其合成方法和應用

在審

• 申請號: 202110012588.2
• 申請日: 2021-01-06
• 公開（公告）號: CN112646834A
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 段禮新;劉中秋;熊文波;李鈺;季愛加;梁錦才
• 申請（專利權）人: 廣州中醫藥大學（廣州中醫藥研究院）
• 主分類號: C12N15/81
• 分類號: C12N15/81;C12N15/61;C12N15/53;C12P33/00;C07J63/00;A61P35/00;A61P29/00;A61P31/12;C12R1/865
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 周文波

1.一種合成羽扇豆醇衍生物的方法，其特征在于，其包括培養細胞；所述細胞能夠產生2,3-氧化鯊烯，且所述細胞含有編碼CYP450酶的第一基因、編碼羽扇豆醇合成酶的第二基因和編碼CPR還原酶的第三基因；

其中，所述CYP450酶選自：CYP51H10、CYP716A83、CYP88D6、CYP93E3、CYP93E2和CYP716A83中的至少一種，或與所述CYP450酶基因具有相同催化功能的突變體中的至少一種。

2.根據權利要求1所述的合成羽扇豆醇衍生物的方法，其特征在于，所述第三基因選自以下至少一種基因：AaCPR、GgCPR1和AtCPR；

優選地，所述AaCPR的堿基序列如SEQ ID No.1所示；所述GgCPR的序列如SEQ ID No.2所示。

3.根據權利要求1所述的合成羽扇豆醇衍生物的方法，其特征在于，所述第二基因選自：GgLUS1、AtLUS1和KdLUS中的至少一種；

優選地，所述第二基因為GgLUS1。

4.根據權利要求1所述的合成羽扇豆醇衍生物的方法，其特征在于，所述方法包括將所述第一基因、所述第二基因和所述第三基因導入細胞，所述導入細胞的方式為質粒轉染或整合入細胞基因組；

優選地，所述細胞選自：酵母細胞和煙草中的任意一種；

優選地，所述酵母選自釀酒酵母、乳酸克魯維酵母、巴斯德畢赤酵母、非洲酒裂殖酵母和多態漢遜酵母中的任意一種。

5.根據權利要求4所述的合成羽扇豆醇衍生物的方法，其特征在于，當導入細胞的方式為質粒轉染時，所述方法包括將所述第一基因和所述第三基因連接于同一載體進行轉染。

6.根據權利要求4所述的合成羽扇豆醇衍生物的方法，其特征在于，所述方法還包括在導入后，將導入有第一基因、第二基因和第三基因的細胞進行發酵，或將轉染有第一基因、第二基因和第三基因的植物進行培養。

7.根據權利要求6所述的合成羽扇豆醇衍生物的方法，其特征在于，所述方法包括采用半乳糖誘導的表達質粒轉染釀酒酵母，通過碳源限制和分段補料的方式進行發酵；

優選地，發酵的條件為：將酵母細胞在1％～3％葡萄糖為唯一碳源的液體培養基中培養，待培養基中碳消耗完44～52h后，使用半乳糖為唯一碳源，采用分段補料的方式進行發酵。

8.一種羽扇豆醇衍生物，其特征在于，其包括：11α-Hydroxy-lupeol、16β-Hydroxy-lupeol、24-Hydroxy-lupeol、11α-Hydroxy-lupeol衍生物、16β-Hydroxy-lupeol衍生物和24-Hydroxy-lupeol衍生物中的至少一種；

其中，11α-Hydroxy-lupeol衍生物的母核通式如式1所示：

式1：

16β-Hydroxy-lupeol衍生物的母核通式如式2所示：

式2：

24-Hydroxy-lupeol衍生物的母核通式如式3所示：

式3：

式1～式3中，R1和R2均選自羥基、羰基中的任意一種，且R1和R2不同時為羥基，在式1中，當R1和R2同時為羥基時，式1為11α-Hydroxy-lupeol的結構式，在式2中，當R1和R2同時為羥基時，式1為16β-Hydroxy-lupeol的結構式，在式3中，當R1和R2同時為羥基時，式1為24-Hydroxy-lupeol的結構式。

9.如權利要求1～7任一項所述的合成羽扇豆醇衍生物的方法合成的羽扇豆醇衍生物或如權利要求8所述的羽扇豆醇衍生物在制備抗腫瘤藥物、抗炎或抗病毒的藥物中的應用。

10.一種抗腫瘤、抗炎或抗病毒的藥物，其特征在于，其包括有如權利要求1～7任一項所述的合成羽扇豆醇衍生物的方法合成的羽扇豆醇衍生物或如權利要求8所述的羽扇豆醇衍生物。