[發(fā)明專利]一種通過評估分析物的溶劑效應對親和力實驗的影響來指導SPR檢測前處理的方法

有效

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• 申請日: 2021-01-06
• 公開（公告）號: CN112683857B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發(fā)明（設計）人: 單雪蓮;榮乃燕;王卓智
• 申請（專利權）人: 上海藥明生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號: G01N21/552
• 分類號: G01N21/552;G01N1/28
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司 31211
• 代理人: 鄭權

本發(fā)明公開一種通過評估分析物的溶劑效應對親和力實驗的影響程度來指導SPR檢測前處理的方法，是將分析物緩沖液先進行預實驗，計算bulk/R0比值，如果bulk/R0低于一定標準，則不需要換液直接進行SPR檢測，可繼續(xù)后續(xù)實驗；如果產生的bulk/R0高于一定標準，則先進行換液處理。本發(fā)明可以指導和優(yōu)化現有實驗流程，大大提高實驗效率，減少成本損耗。

技術領域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領域，特別是涉及一種通過評估分析物的溶劑效應對親和力實驗的影響程度來指導SPR檢測前處理的方法。

背景技術

表面等離子共振(SPR,Surface Plasmon Resonance)是一種光學物理傳感技術。當入射光以臨界角入射到兩種不同折射率的介質界面時，引起金屬自由電子共振，使電子吸收光能量，從而使反射光在一定角度內大大減弱。其中，使反射光在一定角度內完全消失的入射角成為SPR角。對于特定規(guī)格的儀器，表面等離子共振的發(fā)生角度只與芯片上方液體的折射率成正比，而折射率的變化在一定范圍內與分子濃度成線性相關。利用SPR原理，當分析物流過芯片表面時，芯片表面與分析物結合量的變化會引起芯片上方分子濃度的變化，從而引起金膜表面折射率變化，最終導致SPR角變化。通過監(jiān)測SPR的角度變化，獲得待分析物的濃度、親和力、動力學常數等信息。自1990年第一臺基于SPR原理的BIACORE^TM產品問世以來，其以其獨特的視角揭示了蛋白質、核酸等多種生物分子之間的相互作用。由于無需標記、實時檢測、樣品量少、靈敏度高、方便快捷等優(yōu)點，以Biacore為代表的SPR技術被廣泛應用于基礎科研、藥物研發(fā)、生產質檢等多個領域。憑借其卓越表現，Biacore檢測被收錄進美國、日本與2020版中國藥典，全球超過80％的上市抗體藥物采用其進行研發(fā)和申報。

為保證穩(wěn)定性，市售蛋白中加入保護劑，是行業(yè)內常用的一種手段。添加的蛋白保護劑主要有糖類(海藻糖、蔗糖、甘露醇)，氨基酸類(組氨酸、精氨酸等)及其他(甘油等)。其中糖類是出現頻次最多的，通過對商品化蛋白進行調查發(fā)現：海藻糖，甘露醇，蔗糖最常見的添加劑量為5％-10％，其中海藻糖出現的頻次最多。

基于SPR原理，芯片表面的折射率除與分子濃度和結合到芯片表面的分子質量相關外，還與流經芯片的溶劑種類相關。當分析物流過芯片表面時，會因為分析樣品的溶劑和運行緩沖液之間折光率的差異產生信號差，稱為溶劑效應。海藻糖，甘露醇，蔗糖，甘油等均是高折光率物質，能夠產生非常高的溶劑效應。通常情況下，高折光物質含量越高產生溶劑效應也會越高，在結果分析時，溶劑效應產生的高背景信號在扣除時會對實驗數據和圖譜產生影響，為保證數據的準確性和可靠性，在實驗中需要降低高折光物質含量以降低溶劑效應。因此當分析物中有高折光率物質時，常規(guī)手段是在實驗前將分析物中的高折光物質用透析法或脫鹽柱進行換液去除。換液操作將導致在時間上多花費1-2天，且產生成本的額外消耗。

但換液存在以下問題：①蛋白損耗：換液回收率一般在50％-90％，尤其當蛋白難以純化、價格昂貴或可提供的樣品量很少時，蛋白的損耗率就會成為一個很關鍵的因素；②可能對蛋白穩(wěn)定性或活性產生影響，從而對實驗結果的準確性產生影響；③耗材試劑成本和時間消耗：換液需要額外的人工操作及相關試劑耗材如脫鹽柱、半透膜、緩沖液等。

鑒于以上問題，研究人員希望明確溶劑效應對實驗數據影響程度，以省略不必要的換液操作、減少換液頻率，達到提高效率，減少損耗，減少實驗不確定性因素的目的。

發(fā)明內容

本發(fā)明所要解決的技術問題在于，提供一種通過評估分析物的溶劑效應對親和力實驗的影響程度來指導SPR檢測前處理的方法，以明確哪些情況可以跳過換液步驟，從而節(jié)約成本，提高效率。

為解決上述技術問題，本發(fā)明提供了以下技術方案：

一種通過評估分析物的溶劑效應對親和力實驗的影響程度來指導SPR檢測前處理的方法，包括：