[發明專利]阿爾茨海默病模型非人動物及其制備方法

在審

• 申請號: 202080080862.3
• 申請日: 2020-10-07
• 公開（公告）號: CN114727591A
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發明（設計）人: 白尾智明;關野祐子;花村健次;山崎博幸;小金澤紀子
• 申請（專利權）人: 阿爾梅德公司
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 李雪;姚開麗

目前的阿爾茨海默病模型小鼠是通過操縱基因的表達而開發的，該基因與促進淀粉樣蛋白斑沉積等呈疾病特異性的顯著病癥直接相關，該阿爾茨海默病模型小鼠是未病狀態的模型小鼠或病癥與人阿爾茨海默病本質上不同的模型小鼠。本發明的技術問題在于：鑒于上述的現狀，開發更準確地反映阿爾茨海默病的病癥的基因重組非人動物，從而有助于疾病機制的闡明或創新藥的研究。在本發明中，通過雜合敲除作為基礎的阿爾茨海默病模型非人動物的腦發育調節蛋白基因，可以對以往的阿爾茨海默病模型非人動物賦予老化風險。該阿爾茨海默病模型非人動物更準確地反映了阿爾茨海默病的病癥。

技術領域

本發明涉及通過使腦發育調節蛋白(drebrin)表達量減半而與以往的阿爾茨海默病模型非人動物相比更準確地反映阿爾茨海默病的病癥的基因重組非人動物、該基因重組非人動物的制造方法、使用了該基因重組非人動物的用于治療和/或預防阿爾茨海默病的藥物的篩選方法。

背景技術

近年來，作為癡呆癥的主要原因的阿爾茨海默病的患者增加，成為社會關注的重大問題，期望能早期確立其治療藥或治療方法。為了研究特定疾病的治療藥或治療方法，通常使用其疾病的模型動物來進行分析。

在阿爾茨海默病患者的死后腦中觀察到老年斑，已知其是“淀粉樣蛋白β蛋白”的聚集體(淀粉樣蛋白斑)。據報道，淀粉樣蛋白β蛋白的沉積是在病理學上能確認到的最早期的病變，淀粉樣蛋白β蛋白聚集并直接表現出神經細胞毒性。而且，目前被廣泛接受的是：根據家族性阿爾茨海默病患者的基因分析，阿爾茨海默病的發病與淀粉樣蛋白β蛋白的產生和蓄積的異常存在廣泛的關聯。這被稱為淀粉樣蛋白級聯假說。由此，通過眾多的研究已廣泛接受淀粉樣蛋白β蛋白是阿爾茨海默病的主要原因(非專利文獻1)。

在阿爾茨海默病中，老化被認為是最大的風險因素(非專利文獻2)。然而，如上所述，其主要原因是淀粉樣蛋白β蛋白，因此，以往其模型小鼠是通過操縱基因的表達而開發的，該基因與促進淀粉樣蛋白斑沉積等呈疾病特異性的顯著病癥直接相關(非專利文獻1)。然而，由于即使促進淀粉樣蛋白斑的沉積也不易引起作為臨床癥狀的癡呆或作為阿爾茨海默病后期的病理影像的神經原纖維纏結，或者反而引起非常嚴重的病理變化，因此認為目前的阿爾茨海默病模型小鼠是未病狀態模型小鼠或病癥與人阿爾茨海默病本質上不同的模型小鼠。

本發明人們在世界上首次發現在發育過程的神經細胞中大量表達的作為肌動蛋白結合蛋白的腦發育調節蛋白(Drebrin)(例如，參照非專利文獻3及4)，并且已經證明：該腦發育調節蛋白通過改變肌動蛋白纖維的性狀來參與神經細胞的形態形成、尤其是突起形成(例如，參照非專利文獻5～7)；在發育過程中遷移的神經細胞存在于全部的細胞體和突起中，但成熟的神經細胞特異性地存在于棘結構中(例如，參照非專利文獻8～10)。腦發育調節蛋白存在胚胎型(embryonic type)的腦發育調節蛋白E和成體型(adult type)的腦發育調節蛋白A這兩種亞型(例如，參照非專利文獻4)，對成熟神經細胞的棘呈現特異性的腦發育調節蛋白A具有僅在神經細胞中表達的特征(例如，參照非專利文獻9和10)。

本發明人們還報道在阿爾茨海默病等癡呆性疾病中樹突棘的腦發育調節蛋白會在廣范圍內消失(非專利文獻11)。近年來，本發明人們制作腦發育調節蛋白的完全敲除小鼠(DXKO)和亞型轉化機制缺損小鼠A(DAKO)，并闡明了腦發育調節蛋白在突觸可塑性中的作用。當研究對學習行為、突觸可塑性的影響時，DAKO小鼠沒有明顯的腦形態異常，但觀察到條件性恐懼記憶的障礙和海馬突觸可塑性的障礙(非專利文獻12)。進而，還揭示出DXKO純合小鼠在神經細胞遷移和嗅覺上出現異常(非專利文獻13)。

現有技術文獻

非專利文獻

非專利文獻1：齊藤貴志、西道隆臣“阿爾茨海默病的模型小鼠”，日藥理志(FoliaPharmacol.Jpn.)144，250-252，2014

非專利文獻2：A ging Cell.17，e12 802，2018