[發明專利]重組人源干擾素誘導蛋白4桿狀病毒

無效

• 申請號: 200710039265.2
• 申請日: 2007-04-09
• 公開（公告）號: CN101285055A
• 公開（公告）日: 2008-10-15
• 發明（設計）人: 孫兵;袁建偉;蔡興峰
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/12;C12N15/866;C12P21/02
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司
• 代理人: 徐迅

技術領域

本發明屬于生物技術領域，更特別的，本發明涉及一種用于表達IFIT4蛋白的重組病毒，以及采用所述重組病毒表達IFIT4蛋白的方法。

背景技術

系統性紅斑狼瘡(SLE)是一種涉及許多系統和臟器的全身結締組織炎癥性疾病，可累及皮膚、漿膜、關節、腎及中樞神經系統等，并以自身免疫為特征，患者體內存在多種自身抗體，不僅影響體液免疫，亦影響細胞免疫，補體系統亦有變化。近年來，由于實驗室檢測技術的發展，臨床診斷水平的提高，本病的發病數增多，僅次于兒童類風濕關節炎，居小兒全身性結締組織疾病中的第2位。

近來多家實驗室利用基因芯片對SLE和健康志愿者外周血白細胞基因表達譜進行對比研究，最重要的發現就是一組IFN誘導基因在SLE中高表達。干擾素誘導蛋白4(IFIT4蛋白)是IFN的下游調控蛋白，有實驗證明IFIT4在SLE病人及在活動期SLE患者中高表達，其水平明顯高于健康人，表明IFIT4可能是SLE非常重要的新的易感基因。初步試驗表明，在SLE病人中，IFIT4的mRNA水平與ANA、Anti-dsDNA、Anti-Sm抗體滴度呈正相關，ANA、Anti-dsDNA、Anti-Sm抗體滴度是目前臨床診斷的指標，但是由于SLE的復雜性，以上的診斷指標不能夠同時適用于一個個體，通常只能為臨床醫生對病人發病情況以輔助判斷。IFIT4與以上提到的診斷指標有一定的相關度，可能成為一個新的指標，從而用于更有效地診斷SLE。

為了對IFIT4進行研究以及研制出可檢測體內IFIT4含量的抗體，需要大量地制備接近于天然IFIT4的蛋白。然而目前本領域還沒有任何利用基因工程手段表達該蛋白的報道。通常制備抗原所采用的系統是原核表達系統，原核蛋白表達系統具備外源基因的高通量表達、易于擴大再生產、低成本、菌體繁殖迅速、無轉錄后修飾和表達蛋白可被標記等優點，然而原核系統表達出的蛋白往往缺乏較好的空間構象和基本的糖基化修飾，與天然蛋白相差甚遠，這導致在某些情況下用原核系統表達的蛋白免疫動物所制備的單抗識別天然表位能力低，而不能用來開發診斷試劑盒。并且還發現，采用大腸桿菌(如BL21)原核系統表達IFIT4無法實現，IFIT4在表達過程中會被降解。

因此，本領域迫切需要開發一種可方便快捷地表達接近于天然IFIT4的重組IFIT4的方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種重組的IFIT4桿狀病毒，其感染昆蟲細胞后可表達出重組的IFIT4蛋白。

本發明的另一目的在于提供可方便快捷地表達接近于天然干擾素誘導蛋白4的重組干擾素誘導蛋白4(IFIT4蛋白)的方法。

在本發明的第一方面，提供一種重組的干擾素誘導蛋白4桿狀病毒，所述的桿狀病毒的基因組中含有一重組表達盒，所述的重組表達盒含有干擾素誘導蛋白4的編碼序列；并且，所述的桿狀病毒可感染昆蟲細胞，從而表達干擾素誘導蛋白4。

在本發明的另一優選例中，所述的重組表達盒從5’至3’依次含有以下元件：

多角蛋白啟動子，

干擾素誘導蛋白4的編碼序列，和

SV40?PolyA轉錄終止序列。

在本發明的另一優選例中，在多角蛋白啟動子與干擾素誘導蛋白4的編碼序列之間還含有蛋白純化標記。更優選的，所述的純化標記為6×HisTag。

在本發明的另一優選例中，所述的桿狀病毒的基因組含有Bacmid?DNA，所述Bacmid?DNA中含有所述重組表達盒，所述的重組表達盒從5’至3’依次具有以下元件：

多角蛋白啟動子，

干擾素誘導蛋白4的編碼序列，和

SV40?PolyA轉錄終止序列。

更優選的，在多角蛋白啟動子與干擾素誘導蛋白4的編碼序列之間還含有蛋白純化標記。更優選的，所述的純化標記為6×His?Tag。

在本發明的另一優選例中，所述桿狀病毒通過以下步驟制備：

(A)將干擾素誘導蛋白4的編碼序列克隆入桿粒中，獲得重組的桿粒；

(B)將(A)獲得的重組的桿粒轉染昆蟲細胞，培養轉染后的昆蟲細胞；和

(C)收獲重組的干擾素誘導蛋白4桿狀病毒。

在本發明的第二方面，提供一種制備所述的桿狀病毒的方法，所述方法包括以下步驟：

(A)將干擾素誘導蛋白4的編碼序列克隆入桿粒中，獲得重組的桿粒；

(B)將(A)獲得的重組的桿粒轉染昆蟲細胞，培養轉染后的昆蟲細胞；和

(C)收獲重組的干擾素誘導蛋白4桿狀病毒。