[發明專利]3T3-L1脂肪前體細胞誘導分化方法

無效

• 申請號: 201210576430.9
• 申請日: 2012-12-26
• 公開（公告）號: CN103060267A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 寧光;方萍;湯正義;崔斌;王衛慶
• 申請（專利權）人: 上海市內分泌代謝病研究所
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 吳瑾瑜

1.一種3T3-L1脂肪前體細胞誘導分化方法，其特征在于，包括以下步驟:

（一）3T3-L1前脂肪細胞株的復蘇：從液氮種取出細胞株，立即置于37℃水浴箱中，至細胞液完全溶解時取出，將復蘇的細胞加入在室溫1000rpm離心5min，棄去上清，再加入培養液，吹打重懸，將重懸的細胞及培養液吸入培養皿中，顯微鏡下觀察細胞形態及數量，將培養皿置于5%CO₂的37℃恒溫培養箱中培養；

（二）3T3-L1前脂肪細胞株的培養：顯微鏡下見細胞貼壁，呈梭行，透亮，細胞每2天更換1次培養液，傾斜培養皿，將培養液用移液管移去，沿壁加入培養液；

（三）3T3-L1前脂肪細胞株的傳代：顯微鏡下見細胞貼壁，呈梭形或多角形，細胞密度約80%，傾斜培養皿，將培養液用移液器移去，沿壁加入溫熱的PBS溶液6ml，晃動培養皿后，用移液器移去，重復一次，加入Trypsin進行消化，顯微鏡下見細胞由不規則多角形或梭形收縮成圓形，過程約30秒，加入培養液終止消化，用移液器吹打，使細胞脫離培養皿底，吸入離心管中，1000rpm離心4min，傾去上清，加入培養液，吹打使細胞分散；取含有細胞的培養液加入孔板，置于5%CO₂的37℃恒溫培養箱中培養；

（四）3T3-L1前脂肪細胞株的誘導分化：上述傳代細胞培養至完全長滿后3天開始誘導分化；加入含有誘導劑（1.0uM地塞米松，1.0mM?IBMX，1.7uM胰島素）和小牛血清（10%）的DMEM培養液，培養2天；顯微鏡下見少數細胞呈圓形，并有脂滴出現；加入僅有1.7uM胰島素(1.7uM）、小牛血清（10%）的DMEM培養液繼續培養；繼續誘導6天后，顯微鏡下見細胞基本呈圓形，細胞內含有多個較大的脂滴，即分化為成熟的脂肪細胞。