[發明專利]苯甲酸半抗原、苯甲酸完全抗原及其制備方法與試劑條

在審

• 申請號: 202010468006.7
• 申請日: 2020-05-28
• 公開（公告）號: CN111892513A
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 張吉;張偉濤;張金超;寧波
• 申請（專利權）人: 深圳市金閱科技有限責任公司
• 主分類號: C07C245/20
• 分類號: C07C245/20;C07K14/765;G01N33/58;G01N33/558
• 代理公司: 深圳市中融創智專利代理事務所(普通合伙) 44589
• 代理人: 葉垚平;李立

本發明公開了一種苯甲酸半抗原、苯甲酸完全抗原及其制備方法與試劑條。該苯甲酸完全抗原中，其苯甲酸分子的抗原決定簇能充分暴露，且具有較完整的空間構象，因此，本發明提供的苯甲酸完全抗原具有較好的免疫原性,可用于免疫分析。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，尤其涉及一種苯甲酸半抗原、苯甲酸完全抗原 及其制備方法與試劑條。

背景技術

免疫分析是以抗原與抗體之間特異性識別和可逆性結合反應為基礎的痕量 分析方法，其不僅適用于大分子化合物(如蛋白質、核酸、細菌)的檢測，也 適用于小分子化合物(如激素、藥物)的測定。建立小分子化合物的免疫分析 方法的關鍵是能夠制備出對小分子化合物具有高親和力和高選擇性的抗體。由 于大多數小分子化合物的分子量小于1000，不具有免疫原性，即缺乏T細胞表 位而無法直接誘導動物機體等產生特異性抗體。然而，小分子化合物可以通過 適當的化學修飾方法，與大分子載體結合，生成小分子化合物-大分子載體的偶 聯物，此偶聯物即為完全抗原，它可以借助T細胞表位來間接誘導B細胞的增 殖及分化，產生特異性抗體。

苯甲酸(Melatonin,MLT)是一種小分子物質，化學名為N-乙酰-5-甲氧 基色胺，分子量僅為232.28D，不具有免疫原性，用于免疫，必須先與蛋白質大 分子載體結合，形成苯甲酸-蛋白質載體偶聯的完全抗原后才具免疫原性。然而， 制備苯甲酸-蛋白質載體偶聯的完全抗原不能影響苯甲酸的空間構象，而且需要 保持苯甲酸抗原決定簇(如5-甲氧基、N-烷基側鏈)的有效性，才能獲得效價 高、特異性強的苯甲酸抗體。因此，如何制備具有良好免疫原性的完全抗原是 建立測定苯甲酸的免疫分析方法的難點。

發明內容

本發明提供了一種苯甲酸半抗原，旨在解決上述問題。

根據本申請實施例的第一方面，提供了一種苯甲酸半抗原，其結構式為：

根據本申請實施例的第二方面，提供了一種苯甲酸完全抗原的制備方法， 包括以下步驟：

提供苯甲酸；

將所述苯甲酸溶于適量蒸餾水中，并將PH調至1～2，在4℃環境下冰浴攪 拌10分鐘，得到反應液；

將預冷的1M亞硝酸鈉溶液緩慢加到反應液中，在4℃環境下繼續反應30分 鐘，得到如權利要求1所述的苯甲酸半抗原。

根據本申請實施例的第三方面，提供了一種苯甲酸完全抗原，其結構式為：

結構式中，R為載體蛋白，n為5_～20的自然數。

根據本申請實施例的第四方面，提供了一種苯甲酸完全抗原的制備方法， 包括以下步驟：

將如權利要求1所述的苯甲酸半抗原在0～4℃保存，以得到第一反應液；

配置載體蛋白的磷酸鹽緩沖液；

將所述第一反應液逐滴加入到所述載體蛋白的磷酸鹽緩沖液中，在0～4℃環 境下攪拌，得到含苯甲酸完全抗原的混合溶液；

將所述混合溶液進行透析后離心，得到含苯甲酸完全抗原的上清溶液。

根據本申請實施例的第四方面，提供了一種檢測苯甲酸的膠體金免疫層析 試劑條，包括背板、樣品墊、金標墊、反應墊和吸水墊，其中所述樣品墊、金 標墊、反應墊和吸水墊依次設置于所述背板上；所述反應墊上具有檢測線和質 控線，所述檢測線包被有苯甲酸完全抗原，所述質控線包被有抗苯甲酸抗體金 標復合物的抗體，所述金標墊上噴有苯甲酸抗體金標復合物，所述苯甲酸完全 抗原的結構式為