[發明專利]一種淘汰轉基因玉米遺傳不穩定植株的篩選方法

在審

• 申請號: 202011643999.3
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN114680008A
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 邢少辰;王云鵬;韋正乙;蔡玉紅;范杰英
• 申請（專利權）人: 吉林省農業科學院
• 主分類號: A01G22/20
• 分類號: A01G22/20;A01G7/06;A01H1/04
• 代理公司: 北京卓嵐智財知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11624
• 代理人: 郭智

1.一種淘汰轉基因玉米遺傳不穩定植株的篩選方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)植株獲取：通過基因工程方法將含有抗除草劑基因的載體導入非轉基因玉米材料中，獲得T0代轉化植株幼苗，待生長狀況穩定后移栽入到種植地中，并讓其自花授粉，成熟期收獲T1代種子；

(2)噴藥篩選：挑選飽滿無病的T1代種子，種植于大田并噴灌澆水；待T1代植株生長至三葉期，進行第一次草甘膦水溶液噴施處理：噴施量為0.3-0.5L/m2；初次噴施處理12-15天，進行第二次草甘膦水溶液噴施處理：噴施量為0.7-0.9L/m2；第二次噴施處理18-22天，進行第三次草甘膦水溶液噴施處理：噴施量為1.2-1.5L/m2；第三次噴施處理25-28天，進行第四次草甘膦水溶液噴施處理：噴施量為1.5-1.7L/m2；四次噴施處理均采用葉片噴施方式，草甘膦水溶液濃度為500-700mg/L；四次噴施處理期間，觀察植株存活情況，不斷淘汰死亡植株；

(3)目的植株獲取：讓經過四次草甘膦水溶液噴施處理的存活植株自花授粉；待玉米苞葉逐漸變黃而松散、籽粒基部出現黑帽層即可收獲，干燥、脫粒后置于-30℃環境下冷藏保存。

2.根據權利要求1所述的一種淘汰轉基因玉米遺傳不穩定植株的篩選方法，其特征在于，所述非轉基因玉米的材料為魯單981、正大619或鄭單958。

3.根據權利要求1所述的一種淘汰轉基因玉米遺傳不穩定植株的篩選方法，其特征在于，所述基因工程方法為花粉管通道法或農桿菌轉化法。

4.根據權利要求1所述的一種淘汰轉基因玉米遺傳不穩定植株的篩選方法，其特征在于，所述步驟(2)中除草劑草甘膦水溶液的噴施篩選為：挑選飽滿無病的T1代種子，種植于大田并噴灌澆水；待T1代植株生長至三葉期，進行初次草銨膦水溶液噴施處理：噴施量為0.45L/m²；初次噴施處理13天，進行第二次草銨膦水溶液噴施處理：噴施量為0.82L/m²；第二次噴施處理20天，進行第三次草銨膦水溶液噴施處理：噴施量為1.38/m²；第三次噴施處理26天，進行第四次草銨膦水溶液噴施處理：噴施量為1.65/m²；四次噴施處理均采用葉片噴施方式，草銨膦水溶液濃度為600mg/L；四次噴施處理期間，觀察植株存活情況，不斷淘汰死亡植株。

5.根據權利要求1所述的一種淘汰轉基因玉米遺傳不穩定植株的篩選方法，其特征在于，所述自花授粉的步驟為：玉米植株花期時，在雄穗散粉前套袋，在雌穗即將吐絲時套袋，待玉米雌穗吐絲3天后進行授粉操作，保留柱頭花絲5cm，收集雄穗花粉散落在同一植株的雌穗的花絲上并套袋。

6.根據權利要求5所述的一種淘汰轉基因玉米遺傳不穩定植株的篩選方法，授粉操作全部結束后，需將授過粉植株的雄穗剪去。