[發明專利]一種含有蛋白的保護劑及間充質干細胞因子的保存方法

在審

• 申請號: 202011634825.0
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112625114A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 孫曉晨
• 申請（專利權）人: 瑞諾威德（杭州）醫學科技有限公司
• 主分類號: C07K14/475
• 分類號: C07K14/475;C12N5/0775
• 代理公司: 天津合正知識產權代理有限公司 12229
• 代理人: 邢月

本發明提供了一種含有蛋白的保護劑及間充質干細胞因子的保存方法，一種含有蛋白的保護劑，該保護劑包含1?5g/L的大豆肽、1?5g/L的人參肽、0.5?1.5g/L的白蛋白、0.5?1.5g/L的谷胱甘肽、0.7?1.2g/L的谷氨酰胺、80?120IU/ML的表皮細胞生長因子與80?120IU/ML的成纖維細胞生長因子。本發明所述的間充質干細胞因子的保存方法采用人臍帶間充質干細胞作為活性細胞因子的來源，間充質干細胞的上清液中富含表皮生長因子、血管內皮生長因子和干細胞因子等活性因子成分，該活性因子能夠促進體內干細胞的生長和增殖，促進腸道內的細胞組織等加快增殖速度。

技術領域

本發明屬于生物干細胞領域，尤其是涉及一種含有蛋白的保護劑及間充質干細胞因子的保存方法。

背景技術

間充質干細胞是指具有三胚層分化潛能的一類干細胞亞群，在特定環境下，理論上可以誘導分化為人體任何一種組織細胞，主要來源于人體中廣泛存在的間質組織，特別是骨髓、脂肪、臍帶和胎盤等，由于其具有強大的增殖能力，較強的分化能力，低免疫原性和免疫調節功能，其在臨床上的應用價值越來越受人們關注。隨著對間充質干細胞研究的不斷深入，其分泌因子已成為研究的熱點。間充質干細胞可以分泌多種細胞因子，這些細胞因子可有效地調控機體細胞信號傳導、活化人體干細胞，進而生理性修復或替代機體損傷、病變及衰老的細胞。

有研究表明在培養的過程中臍帶間充質干細胞能分泌多種細胞因子，如分泌表皮生長因子(Epidermal Growth Factor，EGF)，肝細胞生長因子(Hepatocyte GrowthFactor，HGF)，腫瘤壞死因子(Tumor Necrosis Factor，TNF)，血管內皮生長因子(Vascularendothelial Growth Factor，VEGF)，神經生長因子(Nerve Growth Factor，NGF)等，這些細胞因子都能在一定程度上促進皮膚細胞生長、改善細胞生長微環境、促進傷口愈合、延緩衰老、改善皮膚生長狀態等作用,但是間充質干細胞因子長期保存的話其活性普遍下降，使用效果減弱，因此如何制備一種可長效保存間充質干細胞因子成為了本領域技術人員亟待解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明旨在克服現有技術中的缺陷，提出一種含有蛋白的保護劑及間充質干細胞因子的保存方法。

為達到上述目的，本發明的技術方案是這樣實現的：

一種含有蛋白的保護劑，該保護劑包含1-5g/L的大豆肽、1-5g/L的人參肽、0.5-1.5g/L的白蛋白、0.5-1.5g/L的谷胱甘肽、0.7-1.2g/L的谷氨酰胺、80-120IU/ML的表皮細胞生長因子與80-120IU/ML的成纖維細胞生長因子。

優選的，所述的保護劑包含1-5g/L的大豆肽、1-5g/L的人參肽、1-1.5g/L的白蛋白、1-1.5g/L的谷胱甘肽、1-1.2g/L的谷氨酰胺、80-120IU/ML的表皮細胞生長因子與80-120IU/ML的成纖維細胞生長因子。

一種含有蛋白的保護劑的制備方法：包括如下步驟：將大豆肽、人參肽、白蛋白、谷胱甘肽、谷氨酰胺、表皮細胞生長因子與成纖維細胞生長因子混合均勻后即得。

一種間充質干細胞因子的保存方法，包括如下步驟：

(1)臍帶組織培養：將組織塊接種于培養瓶底部，然后添加培養液，培養7-8天后，組織塊周圍有成纖維狀細胞爬出，去除組織塊更換培養液繼續培養1-2天，培養得到的細胞為P0，將貼壁細胞轉移到其他培養瓶中培養，培養得到的細胞為P1；

(2)間充質干細胞傳代培養：將P1細胞傳代培養至P6，收集P2至P6細胞的培養上清液，在P2至P6細胞的培養基中加入權利要求1或2所述的保護劑，然后置于溫度為35-40℃、CO₂濃度為3-8％的條件下培養，培養至細胞融合度達到70-90％時，將細胞進行水浴熱激，然后在低壓氧倉中處理5-20分鐘，再放入低氧環境中處理5-20分鐘，然后取出繼續培養；