[發明專利]香菇漆酶LeLac11及其在提高微生物耐脅迫能力中的應用

有效

• 申請號: 202011631100.6
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112779230B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 趙妍;陳明杰;楊煥玲;仝宗軍;雋加香;董沁;李治平;王耀冉
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12N15/80;C12N1/21;C12N1/15;C12R1/19
• 代理公司: 上海諾衣知識產權代理事務所(普通合伙) 31298
• 代理人: 劉艷芝

本發明公開了香菇漆酶LeLac11及其在提高微生物耐脅迫能力中的應用，所述的香菇漆酶LeLac11的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本發明通過將香菇漆酶LeLac11基因轉入適合的微生物宿主體內，使宿主表達漆酶，提高宿主細胞的耐冷脅迫能力、耐熱脅迫能力、耐鹽脅迫能力、耐重金屬鉛和鎘脅迫能力。本發明的香菇漆酶LeLac11來源于真菌，通過轉入適合的微生物宿主中，能夠提高宿主的耐脅迫能力。

技術領域

本發明屬于氧化酶技術領域，涉及一種香菇漆酶LeLac11及其在提高微生物耐脅迫能力中的應用。

背景技術

香菇(Lentinula edodes(Berk.)Pegler)在分類學上屬于擔子菌門、傘菌綱、傘菌目、光茸菌科、香菇屬。香菇屬于木腐菌類，栽培生產需要木質素的降解提供充足的營養以供菌絲生長及子實體發育，并且屬于中低溫型食用菌，在30℃時菌絲生長速率顯著下降(王波等.香菇菌株菌絲和子實體生長耐高溫試驗研究[J].吉林農業大學學報,2004,26(2):145-147)，高溫直接導致香菇產量的減少和品質的下降。

漆酶(Laccase，EC1.10.3.2)是一種含銅的多酚氧化酶，能催化聯苯酚、多氨基苯等物質的氧化。漆酶的氨基酸序列同源性差異較大，但其催化位點的氨基酸序列較保守，參與底物識別和催化反應的核心結構類似，在DNA水平上，參與編碼的核心蛋白質的序列具有相似性(季立才,胡培植.漆酶的結構、功能及其應用[J].氨基酸和生物資源,1996,18(1):25-29)。漆酶在植物中主要起到合成木質素的作用，而真菌分泌的漆酶作用相反，主要起降解木質素的作用，真菌漆酶具有更廣泛的應用前景和價值(Zoppellaro G,Sakurai T,Huang H.A novel mixed valence form of Rhus vernicifera laccase and itsreaction with dioxygen to give a peroxide intermediate bound to thetrinuclear center[J].J Biochem,2001,129(6):949-953.)。漆酶在食用菌栽培中具有重要作用，與原料利用、菌體生長發育、子實體質量和產量以及抗雜菌污染等生理過程密切相關(張鵬,王延鋒,潘春磊,等.食用菌漆酶生物學性質及其應用研究進展[J].生物技術通報,2014,(9):39-44；朱海瀟.食用菌產漆酶能力的比較及漆酶性能的研究[D].福建農林大學,2008)。任鵬飛等通過分析香菇不同生長階段酶活與農藝性狀的相關性分析發現，漆酶活性與產量呈顯著正相關(任鵬飛,任海霞,曲玲,等.香菇胞外酶活性變化及其與農藝性狀的相關性分析[J].山東農業科學,2010,12:11-14.)。嚴培蘭等發現漆酶活性高的黑木耳菌株，栽培產量高的同時，其抗霉能力也高(嚴培蘭,高君輝,譚琦,等.黑木耳的抗霉能力、產量性狀與不同胞外酶活的相關性[J].食用菌學報,1999,6(1):7-10.)。我國是食用菌產量和種類大國，具有明顯的資源優勢，食用菌漆酶的功能研究對于提高產量和菌種資源利用具有重要意義，同時也將為食用菌菌種的遺傳改良提供參考。

發明內容

本發明的目的在于提供一種香菇漆酶LeLac11及其在提高微生物耐脅迫能力中的應用。將該香菇漆酶LeLac11的核苷酸序列轉入宿主體內，通過使宿主表達漆酶，提高宿主細胞的耐冷脅迫能力、耐熱脅迫能力、耐鹽脅迫能力、耐重金屬鉛和鎘脅迫能力。

本發明的香菇漆酶LeLac11，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本發明的香菇漆酶的編碼基因LeLac11，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本發明提供香菇漆酶LeLac11在提高微生物耐脅迫能力中的應用。本發明中所述的微生物可以為真菌或者細菌。在本發明具體實施方式中，采用的微生物為大腸桿菌。本發明所述的耐脅迫能力包括耐冷脅迫能力、耐熱脅迫能力、耐鹽脅迫能力、耐重金屬鉛和鎘脅迫能力。