[發明專利]一種核酸適配體-四鏈體的尿液氨基酸檢測試劑盒及方法

有效

• 申請號: 202011628243.1
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112611876B
• 公開（公告）日: 2023-09-05
• 發明（設計）人: 于穎彥;李俊;朱正綱
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬瑞金醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/574;G01N21/76;C12N15/11;C12N15/115
• 代理公司: 上海領匠知識產權代理有限公司 31404
• 代理人: 劉國華

本發明屬于醫學檢測領域，具體涉及一種核酸適配體?四鏈體的尿液氨基酸檢測試劑盒及方法。本發明公開了一種核酸適配體?四鏈體的尿液氨基酸檢測試劑盒，包括某一氨基酸特異性核酸適配體、DNA?G四鏈體序列，其特征在于所述某一氨基酸特異性核酸適配體與DNA?G四鏈體序列部分序列互補，在無目標氨基酸存在情況下，二者形成互補結合序列，DNA?G四鏈體序列無法形成G四鏈體。本發明方法操作簡便，分析速度快，可以檢測反應體系內nm～μm級范圍的氨基酸濃度，有利于臨床開展工作以及胃癌高發區的篩查使用。

技術領域

本發明屬于醫學檢測領域，具體涉及一種核酸適配體-四鏈體的尿液氨基酸檢測試劑盒及方法。

背景技術

代謝組學是繼基因組學和蛋白質組學之后新發展起來的一門學科，它通過對人體內小分子代謝物進行精準定性定量，分析代謝物與人體生理病理變化的關系，研究疾病發生發展、尋找疾病生物標記物、預測疾病預后等。代謝組學在臨床診斷上將有廣闊的發展前景，主要應用方向有四個方面：在臨床診斷中的應用、在病因與病理機制中的研究應用、在臨床用藥指導中的應用、在臨床前動物模型篩選上的應用。

中國發明專利(CN201310556941.9)公開了通過氣象色譜-質譜聯用技術在胃癌患者尿液中發現了一組升高的小分子氨基酸可以作為胃癌篩查的標志物。尿液小分子生物標志物的新發現使得無創性胃癌篩查與診斷成為可能。然而，前期在胃癌患者尿液發現的氨基酸類屬于小分子物質，需要依賴氣相色譜/質譜(GC/MS)分析儀等高級精密儀器，此類儀器并非臨床常規使用儀器，故難以在臨床推廣，更難以應用到胃癌高發區的人群普查。

發明內容

本發明的目的在于提供一種核酸適配體-四鏈體的尿液氨基酸檢測試劑盒及方法，以滿足無創性胃癌普篩的需求。

本發明公開了一種核酸適配體-四鏈體的尿液氨基酸檢測試劑盒，包括某一氨基酸特異性核酸適配體、DNA?G四鏈體序列，其特征在于所述某一氨基酸特異性核酸適配體與DNA?G四鏈體序列部分序列互補，在無目標氨基酸存在情況下，二者形成互補結合鏈，DNA?G四鏈體序列無法形成G四鏈體。

本發明技術原理基于核酸適配體與靶標氨基酸之間的結合能力大于核酸適配體與互補DNA?G四鏈體序列的相互作用力，將靶向某氨基酸的核酸適配體序列與上述DNA?G四鏈體序列進行雜交；然后向反應體系內加入氨基酸；此時，核酸適配體序列與靶標氨基酸特異性結合，將前述結合的DNA?G四鏈體序列釋放出來；再向體系內加入血紅素分子，血紅素與DNA?G四鏈體序列構成具有催化活性的DNAzyme，利用DNAzyme的HRP活性，可催化超敏化學發光液A、B混合液反應產生化學發光信號，或者催化DAB產生棕色呈色物質的特性，形成的化學發光光密度或者顯色強度與靶標氨基酸分子含量成正比(圖1)。

在一優選例中，所述氨基酸為絲氨酸。

在一優選例中，所述核酸適配體的核酸序列為Seq?ID?No.1所示。

在一優選例中，所述DNA?G四鏈體序列的核酸序列為Seq?ID?No.2所示。

在一優選例中，所述尿液氨基酸檢測試劑盒還包含超敏化學發光液或DAB顯色液；

另一方面，本發明還公開了一種與絲氨酸特異性核酸適配體序列部分互補配對的DNA?G四鏈體序列，其核酸序列為Seq?ID?No.2所示；

另一方面，本發明還公開了上述DNA?G四鏈體序列在制備胃癌診斷試劑中用途。

另一方面，本發明還公開了一種尿液單一氨基酸的檢測方法，包括下列步驟：

某一氨基酸核酸適配體和DNA?G四鏈體序列雜交；

加入待檢尿液樣品；

加入血紅素試劑；

加入超敏化學發光液或DAB顯色液；