[發(fā)明專(zhuān)利]一種熒光探針HM及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011623148.2
• 申請(qǐng)日: 2020-12-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112745287B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-03-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張永斌;段月香;王娟娟;鈔建賓
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山西大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07D311/16
• 分類(lèi)號(hào): C07D311/16;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 山西五維專(zhuān)利事務(wù)所(有限公司) 14105
• 代理人: 張福增

本發(fā)明提供了一種熒光探針HM及其制備方法和應(yīng)用。所述的熒光探針是7?(二乙氨基)?3?[3?(2?羥基?5?甲氧基苯基)?3?氧代?1?丙烯基]香豆素。其制備方法：將7?(二乙氨基)香豆素?3?甲醛和1?(2?羥基?5?甲氧基苯基)乙酮按等摩爾比溶解于乙腈中，滴入哌啶，加熱回流20個(gè)小時(shí)，冷卻至室溫，減壓抽濾，收集濾渣，真空干燥后，得到產(chǎn)物，為紅色固體。該熒光探針對(duì)ClO^?的檢測(cè)是增強(qiáng)型的，并且顯示了高的靈敏性、以及良好的選擇性和穩(wěn)定性，并且具有檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)便、快速，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。此外，通過(guò)結(jié)合激光共聚焦掃描顯微技術(shù)和生物活體成像技術(shù)，該新型熒光探針成功應(yīng)用于細(xì)胞和肝癌小鼠模型中的ClO^?的檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及熒光探針，具體屬于一種熒光探針及其制備方法，以及該探針應(yīng)用于生物樣品中ClO^-的檢測(cè)。

背景技術(shù)

活性氧(ROS)是氧的高活性代謝產(chǎn)物，例如過(guò)氧化氫(H₂O₂)，次氯酸/次氯酸根(HOCl/ClO^-)，單線態(tài)氧(¹O₂)，過(guò)氧亞硝酸鹽(ONOO^-)，羥基自由基(OH·)和臭氧(O₃)。正常水平的ROS可以維持細(xì)胞和組織中的氧化還原穩(wěn)態(tài)，而過(guò)量的ROS引起的氧化應(yīng)激是涉及人類(lèi)多種疾病的發(fā)生發(fā)展與人體衰老的一個(gè)重要因素。作為由髓過(guò)氧化物酶(MPO)催化H₂O₂和氯離子(Cl^-)反應(yīng)產(chǎn)生的氧化產(chǎn)物，ClO^-是一種具有強(qiáng)氧化性的ROS。ClO^-可以與DNA，蛋白質(zhì)和脂質(zhì)相互作用，并涉及多種生物學(xué)過(guò)程，通常是消滅入侵微生物。另外，ClO^-在許多病理過(guò)程中也起著至關(guān)重要的作用，包括腎臟疾病、糖尿病、肝損傷、動(dòng)脈粥樣硬化，甚至癌癥。據(jù)報(bào)道，正常組織中ClO^-的生理濃度為5-25μM，而在病理?xiàng)l件下ClO^-的濃度遠(yuǎn)高于100μM。內(nèi)源性ClO^-的變化被認(rèn)為是一個(gè)ROS耦合疾病發(fā)展的重要指標(biāo)。因此，精確檢測(cè)體內(nèi)ClO^-的變化是及時(shí)診斷ClO^-相關(guān)疾病的一種潛在策略。

目前已經(jīng)存在的檢測(cè)次氯酸或次氯酸鹽的方法有色譜法，化學(xué)發(fā)光法，電分析法等。然而，這些方法靈敏度低，操作復(fù)雜，更重要的是，不能應(yīng)用于體內(nèi)HClO/ClO^-的檢測(cè)。而熒光探針作為最有力的檢測(cè)分析物的工具之一，因?yàn)樗鼈兙哂懈哽`敏度，操作簡(jiǎn)單不需要借助復(fù)雜儀器就可實(shí)現(xiàn)對(duì)分析物的檢測(cè)，并且還具有易于可視化細(xì)胞內(nèi)動(dòng)力學(xué)和高分辨率定位感興趣的生物分子的優(yōu)點(diǎn)。通過(guò)細(xì)胞、組織和活體內(nèi)的熒光成像，可實(shí)現(xiàn)生物體內(nèi)次氯酸鹽的檢測(cè)。因此，這就迫切需要合成具有簡(jiǎn)單、靈敏度高、選擇性好、檢出限低、光穩(wěn)定性好的熒光探針用于檢測(cè)生物樣品的ClO^-。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是提供一種熒光探針HM。目的之二是提供該探針HM的制備方法，該制備工藝簡(jiǎn)單，成本低廉。目的之三是提供該探針的用途，即應(yīng)用于細(xì)胞外源性和肝癌小鼠模型中內(nèi)源性ClO^-的檢測(cè)。該探針應(yīng)具有響應(yīng)迅速、靈敏度高、選擇性高、以及生物相容性好等優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明提供的一種熒光探針HM，其是7-(二乙氨基)-3-[3-(2-羥基-5-甲氧基苯基)-3-氧代-1-丙烯基]香豆素，結(jié)構(gòu)式為：

本發(fā)明提供的一種的熒光探針HM的制備方法，包括如下步驟：

(1)將7-(二乙氨基)香豆素-3-甲醛和1-(2-羥基-5-甲氧基苯基)乙酮按等摩爾比溶解于乙腈中，滴入哌啶，加熱回流20小時(shí)，過(guò)程中不斷有紅色固體析出；

(2)反應(yīng)結(jié)束后，冷卻至室溫，紅色固體大量析出；

(3)減壓抽濾，洗滌沉淀，干燥，得到紅色的固體產(chǎn)物。