[發(fā)明專利]用于人附睪蛋白4檢測的組合物及應用和磁微球電化學發(fā)光免疫檢測試劑盒與檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011622967.5
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112798781A
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發(fā)明（設計）人: 秦軍;謝元東;謝良思;賀琪琪;周璟
• 申請（專利權）人: 北京聯(lián)眾泰克科技有限公司;江蘇優(yōu)尼泰克生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/577;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 北京思創(chuàng)大成知識產(chǎn)權代理有限公司 11614
• 代理人: 高爽

1.用于人附睪蛋白4(HE4)檢測的組合物，其特征在于，包括HE4試劑Ra、HE4試劑Rb、鏈霉親和素超順磁微球；

所述HE4試劑Ra包括含生物素標記的抗HE4單克隆抗體；

所述HE4試劑Rb包括含三聯(lián)吡啶釕標記的抗HE4單克隆抗體；

所述鏈霉親和素超順磁微球包括表面包裹帶有鏈霉親和素的超順磁微球。

2.如權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述超順磁微球的粒徑在1.5～5.0μm。

3.如權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述HE4試劑Ra中，每個抗體分子表面的生物素分子標記量為2～5個；所述HE4試劑Rb中，每個抗體分子表面的釕分子標記量為2～10個。

4.如權利要求1至3任一項所述的組合物，其特征在于，所述HE4試劑Ra的制備方法為：在緩沖液存在的條件下，取抗HE4單克隆抗體與生物素混合，制得所述HE4試劑Ra；所述緩沖液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸鹽緩沖液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羥甲基氨基甲烷緩沖液。

5.如權利要求1至3任一項所述的組合物，其特征在于，所述HE4試劑Rb的制備方法為：在緩沖液存在的條件下，取抗HE4單克隆抗體與三聯(lián)吡啶釕混合，制得所述HE4試劑Rb；所述緩沖液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸鹽緩沖液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羥甲基氨基甲烷緩沖液。

6.如權利要求1至3任一項所述的組合物，其特征在于，還包括定標品和/或清洗液；所述清洗液包括濃度150～200mmol/L的三丙胺和濃度200～400mmol/L的磷酸鹽緩沖液；或濃度80～100mmol/L的二丁基乙醇胺和濃度200～400mmol/L的磷酸鹽緩沖液。

7.如權利要求1至3任一項所述的組合物，其特征在于，所述HE4試劑Ra、所述HE4試劑Rb與所述鏈霉親和素超順磁微球的體積比為(50～80)：(50～80)：(20～40)。

8.如權利要求1至3任一項所述的組合物在制備人附睪蛋白4(HE4)的磁微球電化學發(fā)光免疫檢測試劑盒中的應用。

9.一種人附睪蛋白4(HE4)的磁微球電化學發(fā)光免疫檢測試劑盒，其特征在于，包括如權利要求1至7任一項所述的組合物以及檢測可接受的試劑。

10.一種人附睪蛋白4(HE4)的磁微球電化學發(fā)光免疫檢測方法，其特征在于，該方法基于如權利要求1至7任一項所述的組合物或如權利要求9所述的試劑盒，包括如下步驟：

步驟1：取樣本，依次加入HE4試劑Ra和HE4試劑Rb，于37℃孵育8～12min，最后加入鏈霉親和素超順磁微球，于37℃孵育8～12min，獲得反應液；其中，樣本、HE4試劑Ra、HE4試劑Rb與鏈霉親和素超順磁微球的體積比為15：(50～80)：(50～80)：(20～40)。

步驟2：將所述反應液用磁鐵吸附；

步驟3：取清洗液，清洗未結合到超順磁微球上的標記釕的抗體和樣本，通電，在所述清洗液存在的條件下三聯(lián)吡啶釕發(fā)光；

步驟4：記錄發(fā)光值，建立標準曲線，根據(jù)建立的標準曲線，獲得樣本中HE4的濃度。