[發明專利]一種腺苷粗品母液綠色回收腺嘌呤的方法

在審

• 申請號: 202011618905.7
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112679502A
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發明（設計）人: 李靜;趙鵬飛;謝沛
• 申請（專利權）人: 河南巨龍生物工程股份有限公司
• 主分類號: C07D473/34
• 分類號: C07D473/34
• 代理公司: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 41120
• 代理人: 時亞娟

本發明涉及一種腺苷粗品母液綠色回收腺嘌呤的方法，屬于微生物發酵下游技術領域，包括預處理、減壓濃縮、酶轉、降溫育晶和粗品精制五大步驟，其中，所述酶轉是在所得濃縮液按照30u/g腺苷加入腺苷水解酶使其轉化為腺嘌呤，并對酶轉化條件以及精制條件等進行優化，然后可利用腺嘌呤和腺苷的溶解度差異實現間接回收利用腺苷母液的目的，所得產品收率高、純度高，無有毒和有害物質產生，實現綠色回收，具有巨大的應用價值。

技術領域

本發明屬于微生物發酵下游技術領域，具體地，涉及一種腺苷粗品母液綠色回收腺嘌呤的方法。

背景技術

腺苷（Adenosine），即為腺嘌呤核苷，化學名9-β-D-呋喃核糖基腺嘌呤，分子式為C₁₀H₁₃N₆O₄、相對分子質量為267.24的白色或類白色粉末。腺苷在生物化學上扮演重要角色，包括以腺苷三磷酸（ATP）或腺苷雙磷酸（ADP）形式轉移能量，或是以環裝腺苷單磷酸（cAMP）進行信號傳遞等。此外腺苷也是一種抑制性神經傳導物（inhibitory neurotransmitter），可能會促進睡眠。迄今為止，腺苷已被廣泛應用于化工、食品、醫藥、日化等領域，由此可見，該化合物具有非常廣泛的應用前景。

隨著腺苷應用范圍在不斷擴大，其市場需求也在不斷增長，而目前市場上腺苷的生產方法主要由化學合成法、酶法、發酵法。化學合成法主要以肌苷、次黃嘌呤、2，8-二氯嘌呤、2-甲基硫代腺苷等為原料合成腺苷，但原料價格高，不適合工業生產。酶法即RNA降解法，通過酶解RNA得到腺苷，但也存在生產成本過高等問題，此外RNA降解產生四種核苷的混合物，給后續的提取帶來困難。

對于利用微生物發酵生產腺苷的研究，如Haneda等發明最早見于70年代，經過20年的時間使腺嘌呤核苷的生產達到工業化大規模水平，而國內發酵法生產腺苷起步晚，但經過近些年技術攻關，腺苷產苷已處于國際領先水平。但腺苷下游生產工藝仍未取得明顯好轉，特別是對腺苷粗品母液再回收利用方面一直沒有進步，大量母液浪費掉，導致下游工段整體收率不高，腺苷生產整體成本較高，缺乏足夠的市場競爭力。

所以，在此現狀下，急需尋找一種腺苷母液綠色回收利用的工藝，并且工藝簡單，資源占用少、環境污染小等優勢。在低碳環保的形勢下，開發新的腺苷母液回收利用方法有著很大的意義。

發明內容

為了克服腺苷母液回收利用的不足，本發明的目的在于提供一種腺苷粗品母液綠色回收腺嘌呤的方法。在腺苷粗品母液中通過腺苷水解酶的作用分離提取腺嘌呤，所述方法簡單、設備投入低、無污染、收率高，很好地解決了腺苷母液的回收利用問題。

為了實現上述目的，本發明采用的具體方案為：

一種腺苷粗品母液綠色回收腺嘌呤的方法，包括以下步驟：

步驟一、對腺苷母液進行預處理：將腺苷母液過納濾膜，得清液；

步驟二、將步驟一所得清液進行減壓濃縮，得濃縮物料；

步驟三、按照30u/g腺苷向步驟二所得濃縮物料中加入腺苷水解酶進行酶轉化為腺嘌呤，得酶轉物料；所述酶轉化條件為35-45℃、pH6.5-7.5、轉化時長10-15h；

步驟四、將步驟三所得酶轉物料降溫育晶，并進行離心收集粗品；

步驟五、粗品精制：精制條件為按腺嘌呤濃度為20-80g/L，用30%NaOH調節pH至10-11，升溫至80℃，加食品炭保溫30min，抽濾清液，再降溫至0-20℃，用98%H₂SO₄反調pH至7.0-9.0，抽濾出腺嘌呤，并用冷純水洗至流出液電導≤1000μs/cm，烘干，得腺嘌呤成品。

步驟一中，所述的預處理所用納濾膜分子量為200-1000Da；納濾工作壓力為1-1.5Mpa、工作溫度為35-40℃。

步驟二中，所述的減壓濃縮后濃度為100-200g/L。