[發明專利]一種長鏈非編碼RNA AAGNCR及其應用

有效

• 申請號: 202011617829.8
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112574996B
• 公開（公告）日: 2023-05-26
• 發明（設計）人: 王璟;陳俊峰;滑留帥;邢寶松;盧清俠;郭紅霞;馬強;張華;張家慶;任巧玲;孫加節;潘傳英
• 申請（專利權）人: 河南省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/6888
• 代理公司: 鄭州明華專利代理事務所(普通合伙) 41162
• 代理人: 高麗華

本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及一種長鏈非編碼RNA?AAGNCR及其在預測豬肌內脂肪含量中的應用。本發明通過RT?PCR證實了AAGNCR的客觀存在，同時證明AAGNCR對肌內脂肪細胞脂質沉積具有促進作用。本發明針對AAGNCR序列合成抑制其表達的AAGNCR?siRNA序列，該序列能夠顯著降低細胞中AAGNCR的表達量，對AAGNCR的表達具有明顯的抑制效果。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及一種長鏈非編碼RNA?AAGNCR及其在預測豬肌內脂肪含量中的應用。

背景技術

隨著生活水平的提高，人們對高品質豬肉的需求量逐漸增加，我國地方豬品種相關產品售價顯著高于引進品種。高品質豬肉的本質就是肌纖維直徑小，肌內脂肪含量高。肌內脂肪含量是影響肉質的關鍵因素之一，影響肉的嫩度、風味以及多汁性。肌內脂肪含量受多方面因素調控，例如遺傳、環境、營養水平等，而遺傳的影響最為關鍵。肌內脂肪含量是質量性狀，受微效多基因調控，其遺傳力高達0.6。所以研究其調控機制，通過育種可以達到提高肌內脂肪含量的目的。而肌內脂肪含量須在成年后通過屠宰試驗才能測定，嚴重影響了育種效率，篩選肌內脂肪含量的相關標記，實現仔豬早期篩選，可以極大地提高肌內脂肪含量的育種進程。

長鏈非編碼RNA（long?non-coding?RNA）是近幾年的研究熱點，研究結果證實其通過多種方式參與各種生命過程，例如細胞分化、凋亡、免疫應答、生長發育、糖脂代謝、炎癥以及腫瘤等。本項目通過前期高通量測序，篩選到一個新的lncRNA，命名為AAGNCR，在肌內脂肪組織中表達量高，在脂肪型豬種（高肌內脂肪含量）背最長肌中表達量持續高于瘦肉型豬種（低肌內脂肪含量），提示該lncRNA可能與肌內脂肪含量性狀相關，有可能作為肌內脂肪含量的標記物，但是目前尚無關于該lncRNA功能的報道。

發明內容

針對目前存在的缺陷和問題，本發明提供一種長鏈非編碼RNA?AAGNCR及其在預測豬肌內脂肪含量中的應用。

本發明解決其技術問題所采用的方案是：一種長鏈非編碼RNAAAGNCR，其特征在于：所述RNAAAGNCR的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

一種長鏈非編碼RNAAAGNCR在調控肌內脂肪沉積方面的應用。

上述的應用，所述長鏈非編碼RNAAAGNCR用于促進肌內脂肪沉積。

一種長鏈非編碼RNAAAGNCR在制備用于肌內脂肪細胞標記物制劑方面的應用。

上述的應用，所述長鏈非編碼RNAAAGNCR的干擾序列為AAGNCR?siRNA，其核苷酸序列為:?GACCAGAATTGAGCCA?CATGCTTGT?（SEQ?ID?NO：2）。

上述的應用，所述AAGNCR?siRNA在抑制AAGNCR方面的作用。

一種預測豬肌內脂肪含量的制劑，包括長鏈非編碼RNAAAGNCR。

本發明的有益效果：本發明收集脂肪型豬（高肌內脂肪）和瘦肉型豬（低肌內脂肪）豬種背最長肌的背最長肌組織，利用RT-qPCR技術檢測了AAGNCR的表達情況。結果顯示，在不同發育階段，?AAGNCR在脂肪型豬種肌內脂肪組織中表達持續高于瘦肉型豬種，其中在7日齡，脂肪型豬種AAGNCR表達量是瘦肉型豬種的6.39倍，兩組數據的差異具有統計學意義（ P=0.001）。同時在豬原代肌內脂肪細胞中，?AAGNCR隨著肌內脂肪細胞的脂質生成，表達量顯著升高；通過siRNA介導的干擾AAGNCR，AAGNCR表達量降低，促進脂質生成的標志基因顯著降低，抑制脂質生成的標志基因顯著提高；油紅O染色提示，?AAGNCR表達量降低，肌內脂肪細胞脂質沉積減少。這些研究結果提示AAGNCR對肌內脂肪細胞脂質沉積具有促進作用，其表達量與肌內脂肪含量呈正相關，可以作為肌內脂肪含量早期預測的分子標記物。