[發明專利]一種骨肽組合物、骨肽片劑、制備方法及評價方法

在審

• 申請號: 202011610835.0
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN113398241A
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 許錦珍;劉文君;李詒光;劉丹;廖群;劉巍;劉慧瑩;詹揚
• 申請（專利權）人: 江中藥業股份有限公司
• 主分類號: A61K38/01
• 分類號: A61K38/01;A61K9/30;G01N33/68;G01N33/84;A61P19/10;A61K31/122;A61K35/60
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1.一種骨肽組合物，其特征在于，所述骨肽組合物包括維生素K₂粉以及骨膠原蛋白肽粉；

其中，所述骨膠原蛋白肽粉為利用水解法將骨膠原蛋白水解而成，所述骨膠原蛋白肽粉為牛骨膠原蛋白粉，所述維生素K₂粉與所述骨膠原蛋白肽粉的組分比為1:40。

2.根據權利要求1所述的骨肽組合物，其特征在于，所述維生素K₂粉中的載體為麥芽糊精，在所述骨肽組合物中，所述維生素K₂粉的含量大于40ug/g。

3.一種骨肽片劑，其特征在于，由如上所述權利要求1或2所述的骨肽組合物制成，所述骨肽片劑包括：

骨膠原蛋白肽粉、鯊魚軟骨粉、麥芽糊精、微晶纖維素、維生素K₂粉、硬脂酸鎂、羥丙基甲基纖維素、聚乙二醇以及滑石粉；

其中，所述骨膠原蛋白肽粉為利用水解法將骨膠原蛋白水解而成，所述骨膠原蛋白肽粉為牛骨膠原蛋白粉，所述維生素K₂粉與所述骨膠原蛋白肽粉的組分比為1:40。

4.根據權利要求3所述的骨肽片劑，其特征在于，所述骨肽片劑包括如下重量份的各組分：

骨膠原蛋白肽粉 80份 鯊魚軟骨粉7份

麥芽糊精 4份 微晶纖維素4份

維生素K₂粉 2份 硬脂酸鎂1份

其中，所述羥丙基甲基纖維素、所述聚乙二醇以及所述滑石粉的總重量份之和為2份。

5.一種骨肽片劑的制備方法，其特征在于，用于制備如上述權利要求3或4所述的骨肽片劑，所述方法包括如下步驟：

步驟一：將骨膠原蛋白肽粉與鯊魚軟骨粉進行混合，攪拌均勻后得到混合物A；

步驟二：將麥芽糊精、微晶纖維素以及維生素K₂粉進行混合均勻，以得到混合物B；

步驟三：將所述混合物B與所述混合物A混合均勻，并進行沸騰制粒；

步驟四：將所述步驟三中的顆粒過篩，整粒后得到干顆粒；

步驟五：將硬脂酸鎂與所述干顆粒進行混合以得到混合料；

步驟六：將所述混合料進行壓片得素片；

步驟七：將包衣粉加入純化水中制得包衣液，通過包衣液對所述素片進行包衣得到所述骨肽片劑。

6.根據權利要求5所述的一種骨肽片劑的制備方法，其特征在于，加入的各組分對應的重量份數分別為：

骨膠原蛋白肽粉 80份 鯊魚軟骨粉7份

麥芽糊精 4份 微晶纖維素4份

維生素K₂粉 2份 硬脂酸鎂1份

其中，所述包衣粉包括羥丙基甲基纖維素、聚乙二醇以及滑石粉，對應的總重量份之和為2份。

7.根據權利要求5所述的一種骨肽片劑的制備方法，其特征在于，其中，所述骨膠原蛋白肽粉為利用水解法將骨膠原蛋白水解而成，所述骨膠原蛋白肽粉為牛骨膠原蛋白粉。

8.根據權利要求5所述的一種骨肽片劑的制備方法，其特征在于，在所述步驟四中，將步驟三中的顆粒過60目篩，以得到干顆粒；

在所述步驟五中，所述硬脂酸鎂與所述干顆粒的混合時間為5~15min。

9.一種骨肽組合物的評價方法，其特征在于，用于對上述權利要求1或2所述的骨肽組合物的藥效進行評價，所述方法包括如下步驟：

步驟一：骨質疏松動物模型的構建及口服給藥實驗

將月齡健康雌性SD大鼠適應性飼養1W后，隨機分為3組：對照組、模型組以及實驗組；每天上午，模型組與實驗組的大鼠以 120mg/kg劑量灌胃給與維甲酸混懸液，對照組的大鼠灌胃給與等量蒸餾水，持續2w后；實驗組的大鼠以1.025g/kg 劑量灌胃骨肽組合物，對照組與模型組灌胃等量蒸餾水，持續4w；

步驟二：樣品采集

灌胃4w后，將對照組、模型組以及實驗組的大鼠分別轉移至代謝籠中，連續收集24h大鼠尿液并于-20℃的環境下凍存；次日，利用戊巴比妥以6 mg/kg 的量對大鼠進行腹腔注射，待大鼠麻醉后，剪開大鼠胸腔，從心尖部進針，穿刺進左心室，緩慢抽血，4℃環境下靜置過夜后，以3000 r/s進行離心10min后取血清，于-20℃環境下封裝凍存；心臟穿刺取血后，剪開大鼠腿部皮膚，依次取大鼠左右兩側股骨，去除軟組織后，右股骨固定于組織固定液中，于4℃的環境下保存；左股骨包裹于用生理鹽水浸濕的紗布中，于-80℃的環境下凍存；

步驟三：骨骼特性測量

對對照組、模型組以及實驗組的小鼠進行骨骼特性指標測量，測量項目包括股骨長度，股骨干重，股骨指數以及脛骨長度；

步驟四：血液中骨鈣含量檢測

配制10μg/ml含Ca/P的混合標準貯備溶液，標準溶液系列由標準貯備液逐級稀釋配得，介質為5% Merk級硝酸；以5% Merk級硝酸為介質配制10μg/ml銠、錸標準溶液，并稀釋至1μg/ml，作為內標溶液；調諧溶液為10ng/ml的鋰、鈷、釔、鈰、鉈混合標準溶液（2%硝酸介質）；稱取各大鼠股骨樣本0.05g，利用5% Merk級硝酸定重至50ml PET塑料瓶中混勻，同時設定空白組，在優化實驗條件下，選擇同位素⁴³Ca，對樣品消解液進行分析測試以得到骨鈣含量；

步驟五：血液中骨堿性磷酸酶、堿性磷酸酶的含量檢測

將-20℃環境保存的各組大鼠血清置于冰上逐漸融化，測定血液中骨堿性磷酸酶、堿性磷酸酶的濃度；

步驟六：尿液中羥脯氨酸濃度測定

將-20℃環境下保存的各組大鼠尿液置于冰上逐漸融化，使用羥脯氨酸試劑盒檢測尿液中的羥脯氨酸濃度；測定步驟包括堿水解，調pH至6.0～6.8，氧化劑氧化，二甲氨基苯甲醛顯色，使用酶標儀在550nm 波長下測定吸光度，最后根據OD值計算待測尿液樣本中的羥脯氨酸濃度；

步驟七：根據骨密度檢測結果、骨骼特性測量參數、骨鈣、骨堿性磷酸酶、堿性磷酸酶以及羥脯氨酸濃度對所述骨肽組合物的藥效進行評價。