[發明專利]一種用于糖化白蛋白檢測的離心式微流控芯片及使用方法

在審

• 申請號: 202011607490.3
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112577902A
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 康之裔;王士磊;高鳳萍;張偉;李燕巍
• 申請（專利權）人: 天津諾邁科技有限公司
• 主分類號: G01N21/01
• 分類號: G01N21/01;G01N21/31;G01N21/78;B01L3/00
• 代理公司: 天津企興智財知識產權代理有限公司 12226
• 代理人: 劉影

1.一種用于糖化白蛋白檢測的離心式微流控芯片，其特征在于：包括芯片盤，芯片盤表面設有樣本輸送單元、稀釋液輸送單元、混合槽和檢測單元，檢測單元設置在芯片盤的邊緣處，混合槽設置在稀釋液輸送單元和檢測單元之間，稀釋液輸送單元的稀釋液定量槽通過一號虹吸流道連接至混合槽，樣本輸送單元的樣本定量槽通過二號虹吸流道連接至混合槽，混合槽通過三號虹吸流道連接至檢測單元。

2.根據權利要求1所述的一種用于糖化白蛋白檢測的離心式微流控芯片，其特征在于：芯片盤整體呈扇形結構，稀釋液輸送單元包括稀釋液存儲槽、稀釋液過渡槽、稀釋液定量槽，芯片盤從內弧外弧的方向依次設置稀釋液存儲槽、稀釋液過渡槽、稀釋液定量槽，稀釋液存儲槽通過一號微流道連通至稀釋液過渡槽，稀釋液過渡槽通過二號微流道連通至稀釋液定量槽。

3.根據權利要求1所述的一種用于糖化白蛋白檢測的離心式微流控芯片，其特征在于：樣本輸送單元包括樣本加樣槽和樣本定量槽，芯片盤從內弧向外弧的方向依次設置樣本加樣槽和樣本定量槽，樣本加樣槽通過三號微流道連接至樣本定量槽。

4.根據權利要求3所述的一種用于糖化白蛋白檢測的離心式微流控芯片，其特征在于：檢測單元包括若干檢測孔和若干定位孔，檢測孔和定位孔契合芯片盤的外弧均勻的分布在芯片盤上，每兩個檢測孔之間設有一個定位孔，其中靠近混合槽的4個檢測孔通過流道連通至混合槽，4個檢測孔從左至右依次作為一號檢測孔、二號檢測孔、三號檢測孔和四號檢測孔。

5.根據權利要求4所述的一種用于糖化白蛋白檢測的離心式微流控芯片，其特征在于：一號檢測孔內設有一號凍干試劑，一號凍干試劑為內因性糖化氨基酸的檢測試劑，主要成分為酮胺氧化酶或果糖基酸氧化酶、過氧化氫酶、色源材料，且還設有輔料、賦型劑和保護劑。

6.根據權利要求4所述的一種用于糖化白蛋白檢測的離心式微流控芯片，其特征在于：二號檢測孔內設有二號凍干試劑，二號凍干試劑為糖化白蛋白的檢測試劑，主要成分為蛋白水解酶、酮胺氧化酶、過氧化氫酶、色源材料、果糖基氨基酸氧化酶，且還設有輔料、賦型劑和保護劑。

7.根據權利要求4所述的一種用于糖化白蛋白檢測的離心式微流控芯片，其特征在于：三號檢測孔內設有三號凍干試劑，三號凍干試劑為白蛋白檢測試劑，主要成分為溴甲酚綠，且還設有輔料、賦型劑和保護劑。

8.根據權利要求7所述的一種用于糖化白蛋白檢測的離心式微流控芯片，其特征在于：賦型劑為惰性物質，包括蔗糖、葡萄糖、海藻糖、松三糖、右旋糖苷和甘露醇，以及聚合物類PEG和PVP；保護劑為蛋白類，包括BSA、明膠、膠原蛋白。

9.根據權利要求3所述的一種用于糖化白蛋白檢測的離心式微流控芯片，其特征在于：一號微流道、二號微流道、三號微流道的寬度均為0.01-1mm，深度均為0.01-1mm；一號虹吸流道和二號虹吸流道內表面為親水性表面。

10.使用權利要求1-9所述的一種用于糖化白蛋白檢測的離心式微流控芯片的方法，包括以下步驟：

S1、將封裝好的稀釋液液囊放入稀釋液存儲槽內，將檢測樣本加入到樣本加樣槽內，然后將芯片盤放置在生化免疫機的檢測平臺固定；

S2、控制生化免疫機啟動，稀釋液囊開啟，生化免疫機的電機旋轉，稀釋液進入稀釋液定量槽內完成定量，同時樣本進入到樣本定量槽內完成樣本的定量；電機轉動的時間為10-300s；

S3、電機停止旋轉，由于一號虹吸流道、二號虹吸流道的親水性，一號虹吸流道、二號虹吸流道打通；電機啟動，稀釋液定量槽的稀釋液在電機轉動產生的離心力作用下，通過一號虹吸流道進入混合槽，樣本定量槽內的樣本在電機轉動產生的離心力作用下，通過二號虹吸流道進入混合槽；

S4、樣本和稀釋液進入到混合槽內，此時控制電機進行加減速轉動，產生震蕩效果使樣本與稀釋液充分混合；

S5、電機停止旋轉，三號虹吸流道打通，樣本和稀釋液的混合液通過三號虹吸流道在離心力的作用下，依次進入一號檢測孔、二號檢測孔、三號檢測孔和四號檢測孔，電機啟動，并進行加減速轉動，使混合液分別和一號檢測孔、二號檢測孔、三號檢測孔和四號檢測孔內的試劑進行反應；

S6、反應完成后，檢測平臺的光學模塊對一號檢測孔、二號檢測孔、三號檢測孔和四號檢測孔進行檢測，光電轉化模塊將一號檢測孔、二號檢測孔、三號檢測孔和四號檢測孔內的光學信號轉化成數學信號，一號檢測孔的吸光度作為A1，二號檢測孔的吸光度作為A2，其中一號檢測孔為輔助檢測孔，用于排除檢測樣本中內因性氨基酸的干擾，

根據糖化白蛋白的檢測原理，使用A2-A1得出的數據即為糖化白蛋白的吸光度，然后通過吸光度與濃度的定標曲線，計算出糖化白蛋白的濃度；

三號檢測孔的吸光度作為A3，然后通過吸光度與濃度的定標曲線，計算出白蛋白的濃度；然后通過公式：

糖化白蛋白(GA)％＝(糖化白蛋白的濃度/白蛋白的濃度×100％)/1.14+2.9計算出糖化白蛋白占總蛋白的比率。