[發明專利]一種產維生素B12的菌株及其應用

有效

• 申請號: 202011594666.6
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112694991B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 李曉宇;謝廣健;高承斌;李海濤;王光明;付海晨;劉嘉莉;劉春風;王煒;張建民;章志峰;劉欣;廖曉光;溫艷云;杜麗娟;呂永健;周峰;馬輝;康麗娟;張玉剛;馬萌;王樂;王公坤;蘭超超;眭明謙;王躍豐;張楷;周明賢
• 申請（專利權）人: 河北華北制藥華恒藥業有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/42;C12R1/01
• 代理公司: 石家莊國為知識產權事務所 13120
• 代理人: 郝曉紅

本發明涉及維生素發酵技術領域，具體公開一種產維生素B12的菌株及其應用。所述產維生素B12的菌株的菌種保藏號為CCTCC NO:M2020913。本發明提供的產維生素B12的菌株具有高產維生素B12的活性，突破了傳統維生素B12發酵單位低的瓶頸。且該菌株的遺傳穩定性好、發酵過程簡單易操作，為維生素B12的工業化生產提供了一種更優質的菌種。

技術領域

本發明涉及維生素發酵技術領域，尤其涉及一種產維生素B12的菌株及其應用。

背景技術

維生素B12又叫鈷胺素，是一種含有3價鈷的多環系化合物，其中4個還原的吡咯環連在一起變成為1個咕啉大環，也是唯一含金屬元素的維生素。高等動植物自身不能合成或制造維生素B12，自然界中的維生素B12都是通過微生物合成的。維生素B12在體內參與制造骨髓紅細胞，具有防止惡性貧血，防止大腦神經受到破壞等重要作用，廣泛應用于醫藥和食品工業。

微生物通過復雜的途徑產生維生素B12，為了維持穩定的維生素B12濃度，其生物合成和轉運通過核糖開關在轉錄或翻譯水平上受到調節。常用的產維生素B12的菌株有P.denitrificans和P.shermanii等，這些菌株的遺傳工具相對較少，且發酵過程復雜，因此菌株發酵工程一直關注于隨機誘變和發酵過程的優化等策略。而目前利用上述策略獲得的產維生素B12的菌株經發酵獲得的維生素B12的平均單位最高也僅保持在290-305mg/L之間，這成為微生物發酵生產維生素B12無法突破的瓶頸。

發明內容

針對現有發酵生產維生素B12存在的上述問題，本發明提供一種產維生素B12的菌株及其應用，其具有高產維生素B12的優勢，在適宜條件下，維生素B12的發酵單位可達到340mg/L。

為達到上述發明目的，本發明實施例采用了如下的技術方案：

一種產維生素B12的菌株，其菌種保藏號為CCTCC NO:M2020913。該菌株屬于黏著劍菌(Ensifer adhaerens)，于2020年12月16日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏地址為武漢大學。

相對于現有技術，本發明提供的產維生素B12的菌株具有高產維生素B12的活性，突破了傳統維生素B12發酵單位低的瓶頸。且該菌株的遺傳穩定性好、發酵過程簡單易操作，為維生素B12的工業化生產提供了一種更優質的菌種。

本發明還提供所述產維生素B12的菌株的發酵培養基，該培養基包括以下質量配比的組分：玉米漿65-75g/L，氧化鎂0.4-0.6g/L，甘油4.5-5g/L，七水合硫酸鎂1-1.4g/L，硫酸銨0.8-1.2g/L，尿素0.4-0.6g/L，磷酸氫二銨0.6-0.8g/L，磷酸二氫鉀0.6-0.8g/L，硫酸鋅0.06-0.08g/L，碳酸鈣1.74-1.78g/L，液糖44-48g/L，甜菜堿6-10g/L，凝膠均質劑0.8-1.2g/L，七水合氯化鈷0.02-0.04g/L，5.6二甲基苯丙咪唑0.02-0.04g/L和消沫劑0.22-0.26g/L。

上述優選的產維生素B12的菌株的發酵培養基的各組分配比，為所述產維生素B12的菌株發酵生產維生素B12提供了所需的多種營養物質，可長時間維持發酵液中維生素B12的高生產效率。

優選的，該培養基包括以下質量配比的組分：玉米漿70g/L，氧化鎂0.5g/L，甘油4.8g/L，七水合硫酸鎂1.2g/L，硫酸銨1g/L，尿素0.5g/L，磷酸氫二銨0.7g/L，磷酸二氫鉀0.7g/L，硫酸鋅0.07g/L，碳酸鈣1.76g/L，液糖46g/L，甜菜堿8g/L，凝膠均質劑1g/L，七水合氯化鈷0.03g/L，5.6二甲基苯丙咪唑0.03g/L和消沫劑0.24g/L。

上述優選的發酵培養基的各組分配比可以進一步滿足產維生素B12的菌株發酵生產維生素B12營養需求，進而進一步提高維生素B12的發酵產量。