[發明專利]一種靈敏快速適合藥動學研究的血漿中舒芬太尼濃度分析方法

在審

• 申請號: 202011592387.6
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112782305A
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 楊勇;張先鋒;陳鑫;劉旭凌;傅瑤;鐘勘;姜金方;周茂金
• 申請（專利權）人: 蘇州海科醫藥技術有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 劉洪勛

本發明涉及一種靈敏快速適合藥動學研究的血漿中舒芬太尼濃度分析方法，包括以下步驟：步驟1：血漿樣品前處理；步驟2：色譜分離；步驟3：質譜檢測。本發明檢測方法靈敏度高且前處理操作簡單、樣品用量小、儀器分析通量高，適合舒芬太尼貼劑臨床藥動學研究。

技術領域

本發明涉及一種靈敏快速適合藥動學研究的血漿中舒芬太尼濃度分析方法。

背景技術

舒芬太尼一種強效的μ受體激動劑，具有極易通過神經細胞膜和血腦屏障的特點，是芬太尼類藥物中鎮痛效果最強的藥物。舒芬太尼注射液于1984年經美國FDA批準上市。由于舒芬太尼藥效很強、較低濃度的血漿藥物即可達到藥效，因此臨床藥物監測所使用的分析方法通常需要具有較高的靈敏度。舒芬太尼貼劑為一種改良型新藥，目前處于臨床研究過程中。通過體表給藥的方式，降低藥物的毒副作用、延長作用時間，具有樂觀的臨床應用前景。然而體表給藥局部作用較好，其生物利用度較低，因此血液濃度較低，這對分析方法的靈敏度有進一步的挑戰。為了支持舒芬太尼貼劑的藥動學研究，需要建立一種超靈敏、前處理簡單、樣本用量小、儀器分析速度快速的分析方法。

液相色譜-串聯質譜聯用法(LC-MS/MS)由于其優異靈敏度被廣泛的用于分析血液、乳汁、尿液等生物基質中的舒芬太尼藥物濃度。LC-MS/MS法通常分為3個主要步驟，即樣品前處理、色譜分離和質譜檢測。為了達到靈敏的分析生物基質中舒芬太尼濃度的目的，目前已報道的技術中，樣品前處理方法通常使用了0.2mL以上較大的樣本體積，并且使用了復雜的樣品濃縮技術，如液-液萃取法和固相萃取法，因此不適合臨床藥動學研究中使用。已報道技術目的多為藥物濫用監測，常常同時分析多種神經系統藥物。為了滿足多種不同極性藥物的同時監測，色譜常常使用梯度洗脫，且需要較長的色譜分離時間，這降低了儀器分析的通量。

發明內容

本發明的目的是提供一種靈敏快速適合藥動學研究的血漿中舒芬太尼濃度分析方法。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種靈敏快速適合藥動學研究的血漿中舒芬太尼濃度分析方法，包括以下步驟：

步驟1：血漿樣品前處理，在96孔板中加入血漿樣品，內標溶液，加入甲醇，渦流振蕩，離心，取出上清，加入超純水，渦流混勻，進樣10.0μL，進行LC-MS/MS分析；

步驟2：色譜分離；

色譜條件，色譜柱：Venusil ASB-C18柱，3μm，50×4.6mm；柱溫：40℃；流動相A相選用2mM醋酸銨水溶液含0.2％甲酸，流動相B項為乙腈含0.1％甲酸，采用體積比為40：60的A：B相等度洗脫，色譜運行時間為3min，自動進樣器溫度為4℃，流動相的流速為：0.60mL/min；

步驟3：質譜檢測；

質譜條件：電噴霧電離源；電壓為5500V；離子源溫度為500℃；Curtain Gas和CID壓力分別為40和10psi；掃描模式為MRM；監測離子反應分別為：舒芬太尼，m/z 387.3→238.1；芬太尼，m/z 337.4→188.1；CE為25eV；DP為100V；掃描時間為200ms。

優選地，步驟1血漿樣品前處理，取50.0μL血漿樣品，分別加入50.0μL內標工作液、200μL甲醇，渦流混勻，以3900rpm轉速離心10min，取出上清100μL轉移至96孔板中，加入50.0μL超純水，渦流混勻，取10.0μL進行LC-MS/MS分析。

借由上述方案，本發明至少具有以下優點：

1、本發明采用簡單的蛋白沉淀法處理血漿樣品，且沒有復雜的濃縮過程，前處理通量較高，且儀器分析速度快，分析時間僅為3min。

2、本發明樣品消耗量小，僅為50.0μ/L，適合臨床藥動學研究使用。