[發明專利]一種富硒螺旋藻蛋白分離純化的方法

有效

• 申請號: 202011591415.2
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112645999B
• 公開（公告）日: 2023-07-18
• 發明（設計）人: 李樹波;黃麗;蔣萍櫻子;白云霞;劉小玲
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K1/18;C07K1/30;C07K1/34;C07K1/36
• 代理公司: 廣西匯佳知識產權代理事務所(普通合伙) 45125
• 代理人: 滕藝瓊

本發明公開了一種富硒螺旋藻蛋白分離純化的方法，包含以下操作步驟：(1)取藻粉，加入PBS緩沖液，反復冷凍、融解，超聲，得到藻細胞破碎液，離心，取上清液，鹽析至飽和度，離心，獲得粗蛋白，加PBS緩沖液溶解粗蛋白，透析脫鹽后真空冷凍干燥，得到富硒螺旋藻總蛋白粉末；(2)加PBS緩沖液溶解，超聲，離心，過濾，收集濾液得富硒螺旋藻蛋白溶液；(3)選擇弱陰離子DEAE作為離子交換劑，梯度洗脫分離樣品。本發明方法能夠分離出5個蛋白組，分離效果好，純度高，總蛋白含硒量高達66.15％；進一步的本發明分離出的5個蛋白組份，其抗氧化活性具有顯著差異，本發明可分離出活性高的目的蛋白，操作相對簡潔，成本相較低。

技術領域

本發明涉及富硒螺旋藻蛋白分離純化技術領域，特別涉及一種富硒螺旋藻蛋白分離純化的方法。

背景技術

1973年，硒元素被正式列入人體生理所需的14種微量元素之一，而硒攝入量的不足和過量均可對機體造成嚴重的影響。目前，硒具有的生物活性主要包括：(1)抗氧化特性，硒半胱氨酸是谷胱甘肽過氧化酶的活性中心，谷胱甘肽過氧化酶參與機體的抗氧化過程、能清除氧化應激產生的自由基和過氧化脂質，防止氧自由基對機體的損傷；(2)硒參與機體免疫系統的調節，通過激活淋巴細胞酶的活性、提高人體B細胞和T細胞的的增殖、促進吞噬細胞的吞噬和活力以及加強淋巴特異性系統和非特異免疫系統而保護機體，硒通過調節氧化應激和免疫可實現防癌、抗腫瘤作用，抑制肝癌和乳腺癌的發生；(3)硒是良好的天然解毒劑，作為帶負電荷的非金屬離子，可結合機體內帶正電荷的有害重金屬離子，形成金屬-硒-蛋白質復合物排出體外，從而達到拮抗和減弱機體內砷、汞、鉻等重金屬的毒性作用。因此，人體如果缺硒，將會導致多種疾病的發生，例如克山病、大骨節病、多種癌癥等。

硒是維持機體正常運行的必需微量元素，人體缺乏硒會導致多種疾病的發生。由于人體無法合成所需的有機硒，膳食則是人們獲取硒的主要途徑。然而，全球范圍內硒的分布是不均衡的，且天然植物對硒的富集能力差，僅靠天然食物中的硒含量一般不能滿足人體的正常需要，因此如何獲取安全有效的補硒劑日益受到關注。其中，螺旋藻具有營養豐富、規模大、培養簡單、硒耐受性高等優勢，富硒螺旋藻作為一種補硒功能性食品已經得到廣泛應用和認可，且45％～70％的硒以有機形式存在于蛋白質組分中。研究表明硒的加持和螺旋藻豐富的生物活性成分，可使富硒螺旋藻的活性功能尤為多樣和顯著，主要包括抗氧化、抗癌、促進肝組織再生、免疫調節等多個方面。硒蛋白是有機硒的主要存在形態，硒的生物利用度和生物功能很多程度上取決其存在的形態，同時蛋白作為藻類含量最多的生物功能活性成分，因此分離出多種含硒蛋白和其研究生物功能，為提高富硒螺旋藻的功能性研究和經濟效益提供新思路。

目前富硒螺旋藻蛋白分離純化的方法中尚沒有針對富硒螺旋藻蛋白分離純化的專利，已經報道的論文中，主要是針對含硒藻藍蛋白和別藻藍蛋白的分離純化。黃峰使用反復凍融破壁法進行細胞破碎，然后用30～80％的硫酸銨鹽析沉淀獲得藻體總蛋白，再使用HA柱和DEAE-5柱結合分離純化出藻藍蛋白。黃峙使用HA柱和DEAE-52柱層析純化分離出含硒別藻藍蛋白，李農樂使用DEAE-52柱層析純化和過SePhadxeG-10柱分離出藻藍蛋白。

發明內容

本發明針對上述技術問題，發明一種富硒螺旋藻蛋白分離純化的方法，旨在得到一種純度高、操作簡潔的分離純化富硒螺旋藻的方法。

為實現上述目的，本發明提供的技術方案如下：

一種富硒螺旋藻蛋白分離純化的方法，包含以下操作步驟：

(1)取藻粉，加入PBS緩沖液，冷凍，水浴融解，反復冷凍、融解4次，超聲裂解藻體，得到藻細胞破碎液，離心所得藻細胞破碎液，取上清液，用硫酸銨在4℃下過夜鹽析至飽和度為80％，離心，收集沉淀獲得粗蛋白，向粗蛋白中加入少量PBS緩沖液溶解粗蛋白，蒸餾水透析脫鹽后真空冷凍干燥，得到富硒螺旋藻總蛋白粉末；