[發明專利]一種富硒螺旋藻蛋白分離純化的方法

有效

• 申請號: 202011591415.2
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112645999B
• 公開（公告）日: 2023-07-18
• 發明（設計）人: 李樹波;黃麗;蔣萍櫻子;白云霞;劉小玲
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K1/18;C07K1/30;C07K1/34;C07K1/36
• 代理公司: 廣西匯佳知識產權代理事務所(普通合伙) 45125
• 代理人: 滕藝瓊

1.一種富硒螺旋藻蛋白分離純化的方法，其特征在于，包含以下操作步驟：

(1)取藻粉，加入PBS緩沖液，冷凍，融解，反復冷凍、融解，超聲裂解藻體，得到藻細胞破碎液，離心所得藻細胞破碎液，取上清液，用硫酸銨在過夜鹽析至飽和度，離心，收集沉淀獲得粗蛋白，向粗蛋白中加入PBS緩沖液溶解粗蛋白，透析脫鹽后真空冷凍干燥，得到富硒螺旋藻總蛋白粉末；

(2)稱取步驟(1)所得富硒螺旋藻總蛋白粉末至PBS緩沖液，溶解，超聲促溶后離心，再過濾上清液，收集濾液獲得富硒螺旋藻蛋白溶液；

(3)選擇弱陰離子DEAE作為離子交換劑，用PBS緩沖液平衡層析柱，將40mL3.0mg/mL富硒螺旋藻蛋白溶液上柱，先用PBS緩沖液洗脫結合柱子，再依次分別用0.12M、0.2M、0.4M、0.6M、0.8M的NaCl-PBS緩沖液梯度洗脫分離樣品，以洗脫體積為橫坐標，波長280nm處吸光度為縱坐標，繪制蛋白洗脫曲線，收集同一個NaCl-PBS緩沖液洗脫梯度的樣品作為一個組份，即0.12M、0.2M、0.4M、0.6M、0.8M的NaCl-PBS分別對應Se-SP1,Se-SP1,2,Se-SP3,Se-SP4,Se-SP5，即可分離出5個蛋白組，濃縮、透析脫鹽，真空冷凍干燥，得到純化的含硒蛋白組份；

其中，步驟(1)中所述的冷凍溫度為-20℃，時間為3h；所述超聲裂解時間為30min；所述離心皆為10000rpm、4℃離心30min；所述PBS緩沖液的摩爾濃度為0.1M，內含2％聚乙烯吡咯烷酮和0.5％二硫蘇糖醇，pH值為6.8；

其中，步驟(2)中所述離心轉速≥8000rpm，4℃離心20min；

其中，步驟(2)、步驟(3)中所述PBS緩沖液皆為同一規格，所述PBS緩沖液濃度為50mM，pH為7.0，不含有2％聚乙烯吡咯烷酮和0.5％二硫蘇糖醇。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(1)中5g藻粉加入100mLPBS緩沖液。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(1)中冷凍干燥時間為36h，溫度-25℃。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(2)中0.2g富硒螺旋藻總蛋白粉末加入50mLPBS緩沖液。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(2)中4℃下充分溶解30min，超聲促溶5min。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(3)中所述梯度洗脫分離樣品的流速1mL/min。