[發明專利]一種畢赤酵母基因工程菌及其制備D-泛解酸內酯水解酶的方法

有效

• 申請號: 202011587026.2
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112553226B
• 公開（公告）日: 2023-06-13
• 發明（設計）人: 鄭璞;孫若斌;吳丹
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N1/19;C12N15/81;C12N9/18;C12P7/42;C12R1/84
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.一種畢赤酵母基因工程菌，其特征在于，表達載體為pPIC9K；宿主為畢赤酵母GS115；所述畢赤酵母基因工程菌表達編碼D-泛解酸內酯水解酶的基因，所述D-泛解酸內酯水解酶的基因序列為SEQ?ID?NO.2或SEQ?ID?NO.3所示的序列。

2.構建權利要求1所述的畢赤酵母基因工程菌的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）以表達載體pPIC9K構建重組表達載體，構建獲得插入了SEQ?ID?NO.2或SEQ?IDNO.3所示序列的重組表達載體；（2）將所述重組表達載體導入畢赤酵母GS115中獲得表達D-泛解酸內酯水解酶的畢赤酵母工程菌。

3.一種制備D-泛解酸內酯水解酶的方法，其特征在于，將權利要求1所述的畢赤酵母基因工程菌進行高密度發酵。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，初始攪拌轉速400?rpm·min^-1，通氣量為1-3?vvm，控制pH5-5.5，溶氧控制在20-40%，生長期培養溫度為28-30℃。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，溶氧反彈時流加甘油，待溶氧再次反彈時，不再添加甘油，饑餓培養1-2?h后開始流加誘導培養基，所述誘導培養基是含有12ml/L微量元素PTM₁的甲醇。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，流加誘導培養基時，將溫度降至28℃，攪拌轉速提高至800?rpm/min。

7.權利要求1所述的畢赤酵母基因工程菌在制備D-泛解酸內酯水解酶中的應用。