[發明專利]一種高免疫活性酵母細胞壁多糖的提取方法

有效

• 申請號: 202011586062.7
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112760346B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發明（設計）人: 江建梅;徐婷婷;李丹丹;姜峰;劉立娟;周雪玲;楊文嬌;劉銀升;陳志穎
• 申請（專利權）人: 唐山拓普生物科技有限公司;唐山泰普紐特生物科技有限責任公司
• 主分類號: C12P19/14
• 分類號: C12P19/14;C12P19/04;C12N1/06;C12R1/865
• 代理公司: 石家莊領皓專利代理有限公司 13130
• 代理人: 何鑫鑫

本發明涉及天然產物有效成分的提取領域，提出了一種高免疫活性酵母細胞壁多糖的提取方法，包括以下步驟：S1、啤酒酵母預處理S2、凍融法破壁：將預處理的啤酒酵母泥置于?20℃下冷凍1～2h，再置于80℃水中驟然升溫使其融化，后4000r/min離心5～10min，如此反復3次，得沉淀物；S3、酶解：將S2所得的沉淀物與蒸餾水按1:(10～15)的體積混合，用鹽酸調pH值為6～8，加入蛋白酶、多糖酶、復配促進劑，進行超聲波處理，將混合物5000r/min離心5～10min，收集上清液；S4、洗滌干燥：上清液用1～2倍體積的質量濃度為60％～85％乙醇沉淀，沉淀物丙酮洗滌兩次，真空干燥至恒重即得酵母細胞壁多糖干品。通過上述技術方案，解決了現有技術中的純度、提取率低，免疫活性不佳的問題。

技術領域

本發明涉及天然產物有效成分的提取領域，具體的，涉及一種高免疫活性酵母細胞壁多糖的提取方法。

背景技術

酵母細胞壁主要由碳水化合物及蛋白質組成，碳水化合物主要為葡聚糖和甘露聚糖。酵母細胞壁多糖能被動物體內有益菌利用的功能性寡糖，作為一種綠色非營養調控物質，影響糖代謝，促進腸道功能，人體消化道中穩定性好，活性高，具有一定的免疫調節功能，如對沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、肉毒梭狀芽孢桿菌和肉毒梭狀芽孢桿菌等有很好的抑制作用。此外，酵母細胞壁多糖對沙門氏腸炎桿菌、摩氏變形菌、檸檬酸桿菌具有100％的截取作用；其通過物理吸附或直接結合霉菌毒素而不影響其他成分。

由于酵母細胞中的蛋白質和脂類等物質與細胞壁多糖以大分子糖類聚合物的形式存在，因此需要對細胞壁多糖進行分離、提取后再利用。目前，酵母多糖有效成分提取的方法較多，如研磨法、凍融法、高壓均質法、超聲波法、堿溶法、常規水提法、索氏提取法等，這些傳統方法存在著提取率低、純度不高等不足。

發明內容

本發明提出一種高免疫活性酵母細胞壁多糖的提取方法，解決了現有技術中的純度、提取率低，免疫活性不佳的問題。

本發明的技術方案如下：

一種高免疫活性酵母細胞壁多糖的提取方法，包括以下步驟：

S1、啤酒酵母預處理：將啤酒酵母與水按照質量體積比為1:(10～20)的比例混合，充分攪拌均勻，4000r/min離心5～10min，反復洗滌，經100目篩過濾，去除可見雜質，后加入與水等體積的5％酒石酸溶液，攪拌靜置除味，4000r/min離心5～10min，得到啤酒酵母預處理物；

S2、凍融法破壁：將預處理的啤酒酵母泥置于-20℃下冷凍1～2h，再置于80℃水中驟然升溫使其融化，后4000r/min離心5～10min，如此反復3次，得沉淀物；

S3、酶解：將S2所得的沉淀物與蒸餾水按1:(10～15)的體積混合，用鹽酸調pH值為6～8，加入蛋白酶、多糖酶、復配促進劑，進行超聲波處理，將混合物5000r/min離心5～10min，收集上清液；

S4、洗滌干燥：上清液用1～2倍體積的質量濃度為60％～85％乙醇沉淀，沉淀物丙酮洗滌兩次，真空干燥至恒重即得酵母細胞壁多糖干品。

作為進一步的技術方案，所述步驟S3中超聲波處理的條件為溫度45℃，超聲波功率50W，時間4S，間歇5S，超聲時間30min。

作為進一步的技術方案，所述步驟S3多糖酶包括2.5～5‰甘露聚糖酶、0.2～1‰葡聚糖酶、0.2～1‰纖維素酶，所占比例按照啤酒酵母干料質量比計算。

作為進一步的技術方案，所述蛋白酶包括無花果蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶中的一種或多種。

作為進一步的技術方案，所述蛋白酶加入量為啤酒酵母干料的0.1～0.5％。

作為進一步的技術方案，所述復配促進劑為葡萄糖酸錳和葡萄糖酸鈷，其質量比為(4～5):1。