[發明專利]一種人工抗原呈遞納米粒及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011574298.9
• 申請日: 2020-12-25
• 公開（公告）號: CN112843016A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 楊文君;俞建東
• 申請（專利權）人: 浙江康佰裕生物科技有限公司
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K47/34;A61K47/42;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京沁優知識產權代理有限公司 11684
• 代理人: 姜宇

本發明涉及生物學醫藥技術領域，具體涉及一種人工抗原呈遞納米粒，該主要有效成分為PEG和CD47?Fc修飾的PLGA納米粒、腫瘤靶抗原、抗CD28抗體，其中腫瘤靶抗原可以是根據腫瘤細胞的變化而變化，保證被激活和擴增的T細胞對相應腫瘤細胞具有特異性殺傷作用，同時PLGA納米粒表明的PEG和CD47?Fc修飾可以使得本發明中的人工抗原提呈納米粒擁有體內長循環和抗吞噬的優勢。本發明還涉及人工抗原呈遞納米粒的制備方法，操作步驟簡單、可重復性高、制備周期短，利于大批量生產。

技術領域

本發明涉及生物學醫藥技術領域，尤其是涉及一種人工抗原呈遞納米粒及其制備方法和應用。

背景技術

抗原提呈細胞(APC)，如樹突狀細胞(DC)，盡管在體內外都是擴增抗原特異性T細胞的有效工具，但仍存在許多缺陷并需要克服，如擴增技術困難、擴增周期長、資金花費大、非特異性刺激以及活細胞引起的生物安全性等問題。隨著非細胞型人工抗原提呈細胞技術的迅速發展，近年來提出了納米級人工抗原提呈細胞(artificial antigen presentingcells，aAPC)的概念。相比細胞大小的aAPC，aAPC雖然具有更好的生物分布且栓塞率更低的優點，但更容易被巨噬細胞所攝取、與T細胞的接觸表面積更小，導致aAPC擴增T細胞能力相對較弱。因此，如何對aAPC進行優化，提高其體內循環能力、抗吞噬能力以提高其擴增/活化T細胞的能力，進而誘導更完善的免疫反應是目前亟需解決的問題。

發明內容

本發明的目的之一在于提供了一種具有長循環、抗吞噬作用的人工抗原呈遞納米粒。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：一種具有長循環、抗吞噬作用的人工抗原呈遞納米粒，包括PEG化PLGA納米粒，所述PEG化PLGA納米粒表面修飾有CD47-Fc、腫瘤靶抗原和抗CD28抗體得到人工抗原呈遞納米粒。

作為優選，所述人工抗原呈遞納米粒的粒徑范圍為20nm-500nm，不同所述人工抗原呈遞納米粒之間的粒徑偏差在0nm-100nm范圍內。

作為優選，所述PLGA納米粒表面修飾的PEG分子長度范圍在800～6000。

作為優選，所述PLGA納米粒與PEG的重量份數比為1.5-2.0：0.03-0.01；PEG化PLGA納米粒與CD47-Fc、腫瘤靶抗原和抗CD28抗體的重量份數比為5-10：0.03-0.01：0.03-0.01。

在靜脈給藥時，本發明的人工抗原呈遞納米粒表面的PEG化和CD47-Fc分子可保證納米粒在體內有較長的循環時間，并且納米粒表面的CD47-Fc分子與吞噬細胞上的信號調節蛋白-α相互作用，減少吞噬細胞對人工抗原呈遞納米粒的吞噬，使其在體內可以持續高效的活化和擴增T細胞。且通過調整人工抗原呈遞納米粒的粒徑大小和粒徑均勻度即可輕松調整納米粒表面修飾密度以及納米粒與T細胞接觸面積，以上調整能保證納米粒在體內水平對T細胞起到更高效的活化和擴增作用。

本發明的目的之二在于提供了一種具有長循環、抗吞噬作用的人工抗原呈遞納米粒的制備方法。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：一種具有長循環、抗吞噬作用的人工抗原呈遞納米粒的制備方法，操作步驟包括：獲得PEG化PLGA納米粒，然后在表面活化劑的活化下，在所述PEG化PLGA納米粒表面修飾腫瘤靶向抗原、抗CD28抗體和CD47-Fc得到人工抗原呈遞納米粒。

作為優選，所述表面活化劑為(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺。

作為優選，具體包括以下步驟：

1)取5-10重量份PEG化的PLGA納米粒溶液，與0.2-0.4重量份的EDC·HCl溶液和0.2-0.4重量份的NHS溶液混合，并在室溫下攪拌1-4小時；接著將該混合物離心，離心條件為8000-12000rpm，5-10分鐘，即得到沉淀物B；