[發明專利]一種神經干細胞凍存液及其應用

有效

• 申請號: 202011563983.1
• 申請日: 2020-12-25
• 公開（公告）號: CN112640887B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 魏君;蔡萌;曹培;周佳;候夢瑩
• 申請（專利權）人: 武漢睿健醫藥科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 武漢天領眾智專利代理事務所(普通合伙) 42300
• 代理人: 楊建軍

本發明公開了一種神經干細胞凍存液及其應用，涉及生物技術領域。本發明的凍存液包括無機鹽，維生素，化學小分子抑制劑，細胞因子和DMSO等成份，凍存液成分明確，不含血清或動物源性成分。本發明的干細胞凍存液既不使用動物血清，也不含有動物源成分，該凍存液化學成分明確，能夠大大提高細胞復蘇后細胞活力。此外，本發明與商品化對照相比，價格低廉，使用方便，大大降低了細胞凍存過程中的死亡率。因此，本發明所述凍存液大大拓展了誘導神經細胞的臨床應用前景。

【技術領域】

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種神經干細胞凍存液及其應用。

【背景技術】

外胚層是胚胎發育過程中形成的最外層，隨著器官發生的開始，外胚層細胞逐漸分化為大腦，脊髓，感覺器官等重要的系統。其中神經系統是負責思維，情感，感知，運動等功能的重要系統。相比于腫瘤等疾病，目前神經系統疾病的藥物數量較少，且研發周期漫長，其中最為重要的一個原因為外胚層譜系中多種原代細胞的特殊性，例如原代神經元的不可再生性造成了神經系統藥物體外藥物篩選平臺的稀缺。

除了可以用于藥物篩選之外，外胚層細胞的體外再生能治療多種退行性疾病，例如神經退行性疾病是目前常見的老齡化疾病，該疾病的治療及護理費用極其昂貴，而且市面上無特效藥物可以進行有效的治療。神經退行性疾病包括肌萎縮側索硬化癥(ALS)、帕金森病(PD)、阿爾茨海默癥(AD)等疾病。神經退行性疾病和脊髓損傷的研究難點在于中樞神經系統的神經細胞具有不可再生性，體外疾病模型的稀缺是基礎研究的限制性因素，而這類疾病是由于中樞神經的不可逆損傷造成。神經細胞包括神經干細胞，成熟神經元、星形膠質細胞和少突膠質細胞等不同神經細胞類型。而再生醫學的發展為神經退行性領域的發展提供了新的思路。

再生醫學是指利用多種新型技術學科來重建老化或功能損失的組織和器官，并通過多種醫學手段來進行相關疾病治療的新興科學。再生醫學的重要研究方向為正常組織特征與功能的機理，創傷后修復的生物學基礎，以及組織器官的再生機制及多種干細胞分化機理，從而最終獲得有效的生物治療方法。其研究方法綜合了多種手段，包括生命科學、材料科學，臨床醫學等學科的原理和方法，綜合解決用于替代、修復、重建或再生人體各種組織器官的臨床解決方案。

2006年，山中伸彌的團隊發明了一種由OCT4,SOX2,KLF4和c-Myc四種轉錄因子構成的“雞尾酒”法，能夠成功將終端分化的皮膚成纖維細胞重編程成為具有分化神經性的干細胞，這種干細胞被稱為誘導神經干細胞(induced pluripotent cells)(Takahashi K,etal.，Cell，2006，126(4)pp.663-676；Takahashi K andYamanaka S，Cell，2007，131(5)pp.861-872)。這些干細胞具有和胚胎干細胞(embryonic stem cells)類似的分化潛能，能夠形成人體發育最基本的三個胚層：外胚層，中胚層及內胚層，并最終形成多種成體細胞。這一發明突破了在醫學上使用人胚胎干細胞的倫理限制。以神經系統為例，目前在再生醫學領域，神經干細胞及神經元的誘導多采取SMAD途徑雙重抑制法(Dual SMAD inhibition)(Chambers SM,et.al.,Nat Biotechnol，2009，27(3):275-80)，該方法得到的神經干細胞能夠分化為其它類型的神經元細胞，其原理是通過抑制BMP和TGFBeta途徑來模擬胚胎發育早期的信號途徑，從而誘導神經干細胞的產生。其中LDN-193189和SB431542是廣為使用的兩種化學小分子抑制劑，分別通過作用于BMP4途徑中的ALK2和ALK3，以及TGFBeta途徑中的ALK5來達到移植內胚層及中胚層形成，從而起到誘導外胚層發育及神經發生的作用。通過這種方法，可以在血清類成分(Knockout Serum Replacement)的存在下得到誘導的神經細胞(Chambers SM,et.al.,Nat Biotechnol.，2013，30(7):715–720)。這些誘導神經細胞的研究為神經退行性疾病的治療提供了嶄新的思路。