[發明專利]一種半連續培養法培育小球藻的方法

在審

• 申請號: 202011559812.1
• 申請日: 2020-12-25
• 公開（公告）號: CN112646725A
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 束劍峰;戴輝;許玉超;王康;練梅華;李稀
• 申請（專利權）人: 江蘇蘇港和順生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 蘇州拓云知識產權代理事務所(普通合伙) 32344
• 代理人: 王云峰

1.一種半連續培養法培育小球藻的方法，其特征在于，包括以下步驟：將小球藻接種到發酵罐中，不斷添加補料，定期取出部分小球藻，保留部分小球藻培養液作為藻種繼續培養，如此反復；所述小球藻發酵罐培養方式采用的是光能自養與無光照異養的混養方式，即利用一定時間的光能自養和一定時間的無光照異養，所述補料采用的是沼氣工程的膜濃縮沼液與糖蜜。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述光能自養和無光照異樣的時間為12h，所述補料在小球藻培養12-15h之后，每一分鐘補料一次，少量多次，同時實時監控培養液PH，PH控制在7.0-8.0，并且在所述半連續培養法連續生產一個月后，當小球藻的的生長速度3天內達不到2.5×10⁶CFU/ml時則直接全部放罐，清洗發酵罐并空罐滅菌，準備開始第二批生產。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在接種到發酵罐之前，所述小球藻藻種需要純化與活化，小球藻藻種的純化使用的是稀釋涂布平板法，純化培養基采用的是BG-11固體培養基，藻種活化與擴培采用的是BG-11液體培養基，發酵罐基礎培養基則采用的是小球藻異養培養基。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述膜濃縮沼液是對沼氣工程產生的沼液進行多級沉淀、過濾、超濾、反滲透處理后獲得的。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述糖蜜采用制糖廠的廢糖蜜，對所述廢糖蜜使用前處理如下：糖蜜用水稀釋至30-40°BX，加0.2％-0.3％濃硫酸調節PH至3.5-4.0左右，靜置沉淀3-5h后取上清，在通風廚加熱煮沸1-1.5h，再次靜置沉淀3-5h后取上清，加氫氧化鈣調節PH至5.0-5.5左右，并加水稀釋至30-40°BX，靜置8-12h取上清并過濾，稀釋1-2倍，檢測其營養成分后備用。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述膜濃縮沼液和糖蜜均需要高溫蒸汽滅菌后才能使用，其中，糖蜜在滅菌前需添加1.5-2.0g/L檸檬酸，0.005-0.01g/L硫酸亞鐵，0.1-0.2g/L有機硅消泡劑。

7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述小球藻異養培養基成分為：葡萄糖20-30g/L，硝酸鈉1.5-2.0g/L，磷酸二氫鉀1.2-1.8g/L，七水硫酸鎂1.2-1.5g/L，七水氯化鈣0.02-0.05g/L，碳酸鈉0.01-0.03g/L，檸檬酸三納0.01-0.05g/L，膜濃縮沼液10-15g/L，泡敵0.1-0.2g/L，PH7.0-8.0。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述有光照培養時，膜濃縮沼液流速1.8-2.2ml/min，糖蜜液流速0.2-0.4ml/min，無菌空氣通氣量為0.5-0.6m³/h，無光照培養時，膜濃縮沼液流速2.5-2.8ml/min，糖蜜液流速0.6-1.0ml/min，無菌空氣通氣量為0.6-0.8m³/h。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述膜濃縮沼液PH為8.22-9.01，糖蜜PH為5.0-5.5，所述發酵罐中培養液的PH調控以調控膜濃縮沼液流速為主。