[發明專利]CRISPR系統及其在構建SCN1A基因突變的癲癇性腦病克隆豬核供體細胞中的應用有效

申請號：	202011554428.2	申請日：	2020-12-24
公開（公告）號：	CN112575033B	公開（公告）日：	2023-03-10
發明（設計）人：	牛冬;汪滔;陶裴裴;劉瑜;曾為俊;王磊;程銳;趙澤英;馬翔;黃彩云	申請（專利權）人：	南京啟真基因工程有限公司
主分類號：	C12N15/85	分類號：	C12N15/85;C12N15/65;C12N15/62;C12N15/12;C12N5/10;C12N15/113;A01K67/027
代理公司：	南京天華專利代理有限責任公司 32218	代理人：	傅婷婷;徐冬濤
地址：	211306 江蘇省南京市高淳區經***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	crispr 系統及其構建 scn1a 基因突變癲癇性腦病克隆供體細胞中的應用
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【權利要求書】：

1.一種用于豬SCN1A編輯的CRISPR/Cas9系統，其特征在于包含Cas9表達載體和針對豬SCN1A的gRNA表達載體；所述的Cas9表達載體為質粒全序列如SEQ ID NO.2所示的pU6gRNA-eEF1a-mNLS-hSpCas9-EGFP-PURO載體；所述的針對豬SCN1A基因的gRNA表達載體由SEQ IDNO.26和SEQ ID NO.27所示的單鏈DNA退火而成的雙鏈插入載體骨架pKG-U6gRNA所得；該表達載體表達SEQ ID NO.36所示的gRNA，其靶點如SEQ ID NO.21所示；載體骨架pKG-U6gRNA的質粒全序列如SEQ ID NO.3所示；所述的gRNA表達載體和Cas9表達載體的摩爾比為3:1。

2.一種豬SCN1A基因敲除的豬重組細胞，其特征在于由權利要求1所述的CRISPR/Cas9系統共轉染豬原代成纖維細胞經驗證后所得。

3.權利要求1所述的CRISPR/Cas9系統在構建豬SCN1A基因敲除的豬重組細胞中的應用。

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