[發(fā)明專利]一種神經(jīng)干細胞誘導分化培養(yǎng)基及誘導分化方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011538099.2 | 申請日： | 2020-12-23 |
| 公開（公告）號： | CN114736864A | 公開（公告）日： | 2022-07-12 |
| 發(fā)明（設計）人： | 魏君;蔡萌;周佳;侯夢瑩;云軒 | 申請（專利權(quán)）人： | 武漢睿健醫(yī)藥科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/0797 | 分類號： | C12N5/0797;C12N5/0793;C12Q1/02;A61K35/30;A61P25/00 |
| 代理公司： | 南京華訊知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 32413 | 代理人： | 劉怡彣 |
| 地址： | 430075 湖北省武漢市東湖新技術開*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 神經(jīng) 干細胞 誘導 分化 培養(yǎng)基 方法 | ||
1.一種神經(jīng)干細胞及類器官誘導培養(yǎng)基，其特征在于，由基礎培養(yǎng)基和10nM～100μM神經(jīng)誘導化合物組成；其中，基礎培養(yǎng)基包括杜氏改良伊格爾/F12培養(yǎng)基、最低必須培養(yǎng)基非必需氨基酸、氯化鈉、亞硒酸鈉、胰島素和重組人轉(zhuǎn)鐵蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的神經(jīng)干細胞誘導培養(yǎng)基，其特征在于，所述基礎培養(yǎng)基由杜氏改良伊格爾/F12培養(yǎng)基、1％最低必須培養(yǎng)基非必需氨基酸、0.1-0.8g/L氯化鈉、13.6μg/L亞硒酸鈉、20ng/ml-42μg/ml胰島素和50-180ng/ml重組人轉(zhuǎn)鐵蛋白組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的神經(jīng)干細胞誘導培養(yǎng)基，其特征在于，所述基礎培養(yǎng)基含有0.5g/L氯化鈉、13.6μg/L亞硒酸鈉、22ug/ml胰島素和100ng/ml重組人轉(zhuǎn)鐵蛋白。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的神經(jīng)干細胞誘導培養(yǎng)基，其特征在于，所述神經(jīng)誘導化合物為作用于BMP或者TGF信號轉(zhuǎn)導途徑的物質(zhì)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的神經(jīng)干細胞誘導培養(yǎng)基，其特征在于，所述作用于TGF信號轉(zhuǎn)導途徑的物質(zhì)為TGF-β抑制劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的神經(jīng)干細胞誘導培養(yǎng)基，其特征在于，所述TGF-β抑制劑為4-[2-(6-甲基吡啶-2-基)-5,6-二氫-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基]喹啉-6-羧酰胺。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的神經(jīng)干細胞誘導培養(yǎng)基，其特征在于，所述TGF-β抑制劑的濃度為12.5μM。
8.一種誘導神經(jīng)干細胞形成的方法，其特征在于，采用如權(quán)利要求1至7中任一項所述的神經(jīng)誘導培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng)多能干細胞。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述多能干細胞為哺乳動物多能干細胞。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述多能干細胞為人多能干細胞。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述貼壁培養(yǎng)是在基底膜制劑存在下進行。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，所述基底膜制劑為基底膠、層粘蛋白和玻連蛋白的一種或多種的組合。
13.一種將神經(jīng)干細胞進一步分化成神經(jīng)元細胞的方法，其特征在于，采用如權(quán)利要求8至12中任一項所述的方法獲得神經(jīng)干細胞后，在權(quán)利要求1所述的基礎培養(yǎng)基中加入誘導分化物質(zhì)，培養(yǎng)至神經(jīng)元形成。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，所述誘導分化物質(zhì)為CHIR99021、SU5402和DAPT，所述神經(jīng)干細胞進一步分化成痛覺感受器神經(jīng)元。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，所述誘導分化物質(zhì)為Purmorphamine和TGF-β3，所述神經(jīng)干細胞進一步分化成多巴胺能神經(jīng)元。
16.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，所述誘導分化物質(zhì)為乙酸視黃酯，所述神經(jīng)干細胞進一步分化成光感受器神經(jīng)元。
17.采用如權(quán)利要求8所述的方法獲得的神經(jīng)干細胞于制備治療神經(jīng)損傷藥物中的應用。
18.一種類腦器官誘導培養(yǎng)基，其特征在于，由權(quán)利要求7所述的神經(jīng)干細胞誘導培養(yǎng)基和添加劑組成；其中，所述添加劑為ROCK抑制劑Y-27632。
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