[發明專利]一種豬圓環病毒2型Cap蛋白病毒樣粒子保存液及應用

在審

• 申請號: 202011532525.1
• 申請日: 2020-12-23
• 公開（公告）號: CN112245577A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發明（設計）人: 于萍萍;張淵魁;王敏;劉奇;徐慧敏;盧曉楠;劉飛;湯波;韓昱鵬;呂帥陽;聶思靜;劉運平
• 申請（專利權）人: 北京科牧豐生物制藥有限公司;兆豐華生物科技（南京）有限公司;兆豐華生物科技（南京）有限公司北京生物醫藥科技中心;兆豐華生物科技（福州）有限公司
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61K47/26;A61K47/18;A61K47/42;A61K47/12;A61P31/20;G01N33/569
• 代理公司: 北京金蓄專利代理有限公司 11544
• 代理人: 趙敏

本發明所述豬圓環病毒2型Cap蛋白病毒樣粒子保存液，基于鹽離子緩沖液體系，并添加糖類、非離子表面活性劑、金屬離子螯合劑、醇類、蛋白質類穩定劑、氨基酸類以及防腐劑，可有效延長豬圓環病毒2型Cap蛋白的保存期，在2?8℃可以保存12個月，蛋白濃度和活性保持不變，于?20℃以下保存36個月保持蛋白濃度和活性不變，可用于檢測豬圓環病毒抗原濃度試劑盒的標準蛋白的保存液，或者豬圓環病毒2型Cap蛋白亞單位疫苗的稀釋溶液。

技術領域

本發明屬于體外診斷試劑技術領域，具體涉及一種豬圓環病毒2型Cap蛋白病毒樣粒子保存液配方，并進一步公開其應用。

背景技術

豬圓環病毒（Porcinecircovirus，PCV）是迄今發現的最小的動物病毒之一，現已知PCV有兩個血清型，即PCV1和PCV2，PCV1為非致病性的病毒，PCV2為致病性的病毒。其中，豬對PCV2具有較強的易感性，感染豬可自鼻液、糞便等廢物中排出病毒，經口腔、呼吸道途徑感染不同年齡的豬。PCV2是斷奶仔豬多系統衰竭綜合征、皮炎與腎病綜合征等相關疾病的首要致病因子，給養豬業造成巨大的經濟損失。據報道，豬圓環病毒2型（PCV2）在世界范圍內廣泛分布，血清學和病原學調查己證實全世界范圍內許多國家和地區的豬群均存在PCV2感染，幾乎100%的商品化養豬場感染過PCV2，嚴重影響世界養豬業的發展。

我國在2000年首次報道了豬圓環病毒病，至今PCV2已在我國豬群中流行二十年。PCV2通常與其他多種病原混合感染，引發豬群發生嚴重的死亡率，較嚴重的地區暴病時死淘率高達40%。大量的流行病學研究表明，我國豬群中PCV2感染十分普遍，PCV2抗體陽性率高達80%以上，被調查的豬場陽性率高達100%。在2001-2012年期間，中國分離了258株PCV2株，其中有242株序列均為PCV2b基因亞型，約占比93.8%，證明我國近幾年流行的毒株為PCV2b 亞型。近年來研究發現，豬圓環病毒2型ORF2基因Cap蛋白可以在細胞內自主組裝成病毒樣顆粒（VLPs），這種病毒樣顆粒不含病毒核酸但與天然病毒樣粒子結構相似，且能有效繼發細胞免疫和體液免疫。豬圓環病毒2型Cap蛋白作為一種蛋白質，具有蛋白質慣有的不穩定性、易降解失活等特性，并需要低溫保存，因此，尋找開發一種能夠穩定保存豬圓環病毒2型Cap蛋白的保存液，對于保證豬圓病毒Cap蛋白的天然活性和濃度穩定具有重要意義，也為特異穩定的檢測豬圓環病毒抗原的試劑盒開發以及豬圓環病毒Cap蛋白制備的亞單位疫苗的穩定保存提供保障。

發明內容

為此，本發明所要解決的技術問題在于提供一種豬圓環病毒2型Cap蛋白病毒樣粒子保存液配方，以解決現有技術中Cap 蛋白的的保存液穩定性差，而導致的保存困難的問題；

本發明所要解決的第二個技術問題在于提供一種用于檢測豬圓環病毒2型Cap蛋白的校準品和質控品的保存液；

本發明所要解決的第三個技術問題在于提供一種豬圓環亞單位疫苗的效力性。

為了解決上述技術問題，本發明所述一種豬圓環病毒2型Cap蛋白病毒樣粒子保存液，包括鹽離子緩沖液，以及如下濃度的組分：

糖類1-5wt%；

非離子表面活性劑0.1-0.5wt%；

金屬離子螯合劑1-5mM；

醇類1-10wt%；

蛋白質穩定劑0.1-1.5wt%；

氨基酸0.5-1.5wt%；

防腐劑0.001-0.05wt%。

具體的，所述鹽離子緩沖液的濃度為20-150mM。

具體的，所述鹽離子緩沖液包括磷酸鹽緩沖液或Tris-HCI緩沖溶液中的至少一種。

具體的，所述的豬圓環病毒2型Cap蛋白病毒樣粒子保存液：